七氟醚对大鼠缺血再灌注心肌凋亡相关基因表达的影响(1)
【摘要】 目的 探讨七氟醚预处理对大鼠心脏缺血再灌注过程中心肌细胞Bcl-2及Bax 基因表达的影响。方法 24只SD大鼠随机分成3组(n=8)：假手术对照组(C组)、缺血再灌注对照组(IR组)和七氟醚预处理组(s组)。IR组与S组接受左冠脉3 h阻断和3 h再灌注。七氟醚预处理组在缺血前吸入七氟醚，30 min后洗脱15 min。取心肌缺血区组织，RT-PCR测Bcl-2及Bax基因的mRNA表达，免疫印迹法(Western-blot)测蛋白表达。结果 与C组相比较，IR组和S组Bcl-2的mRNA和蛋白表达均下调，而S组高于IR组；Bax的mRNA和蛋白表达IR及S组均高于C组，IR组则高于S组。结论 七氟醚预处理抑制心肌细胞凋亡可能与上调Bd-2基因的表达、下调Bax基因的表达有关。
【关键词】
七氟醚；心肌；心肌再灌注损伤；凋亡
Effected of sevoflurane pretreatment on myocardial Bcl-2 and Bax gene expression during ischemia/reperfusion in rats
, 百拇医药
CHEN Gen-yin,WANG Xu-guang,YANG Zhan，et al.Department of Anesthesiology，First Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang，Guangdong 524001，China
【Abstract】 Objective To investigate the effects ofpretreatment with sevoflurane on myocardial Bcl-2 and Bax gene expression during ischemia-reperfusion in rats.Methods 24 SD rats were randomly divided into 3 groups with 8 animals in each group:sham operation group(group C); ischemia-reperfusion group(group IR)，sevoflurane group(group S).In group IR animals were subjected to 3 h of ischemia by 3 h reperfusion.In group S animals inhales 2%sevoflurane for 30 min followed by 15 min of wash-out before IR.In group C animals underwent no I/R.Myocardium was obtained from marginal zone of ischemic area.The mRNA and protein expression of Bcl-2 and Bax gene were detemined by RT-PCR and western-blot.Results The expression of mRNA and protein expression of Bcl-2 were upregulated in group S and group IR compared with that in group C.The expression of mRNA and protein expression of Bax were down-regulated in group S and group IR.The expression of Bcl-2 gene in group S was higher than tha t in group IR While the expression of Bax gene was lower.Conclusion Sevoflurane pretreatment inhibits myocyte apoptosis inIR myocardiumpartly by modulation of expression of Bcl-2 and Bax genes.
, 百拇医药
【Key words】Sevoflurane；Myocardial；Myocardial reperfusion injury；Apoptosis
研究已表明吸入性麻醉药预处理能模拟缺血预处理效应减轻缺血再灌注所致的心肌损伤[1-3]，但这种心肌损伤保护机制至今尚未完全清楚，有研究证明这与减少缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡的发生有关[4]，但其抑制细胞凋亡的机制至今不甚明确。本研究观察七氟醚预处理对大鼠心脏缺血再灌注过程中心肌细胞Bcl-2及Bax 基因表达的影响，探讨其心肌保护作用机制与凋亡调控基因的关系。
1 材料与方法
1.1 主要试剂和仪器 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、DMSO、DEPC(Sigma公司)；Trizol(Invitrogen公司)；RT-PCR 一步法试剂盒(宝生物(大连)工程有限公司)；GAPDH、Bcl-2、Bax引物(上海生工生物工程技术服务有限公司合成)；100 bp DNA marker、TEMED、6×上样缓冲液(华美生物工程公司)；ECL试剂、Aprotinin(上海华舜生物工程有限公司)；β-actin大鼠多抗IgG、Bcl-2大鼠单抗IgG、Bax大鼠单抗IgG、辣根酶标记山羊抗大鼠IgG(Santa Cruz公司)； PVDF膜 (美国Pall Gelman公司)。
, 百拇医药
1.2 实验分组 健康成年SD大鼠(250~300 g) 24只，雌雄不限，随机分成假手术对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(S组)，每组8只。C组不进行缺血再灌注处理。IR组阻断冠脉3 h，随后再灌注3 h。七氟醚预处理组用麻醉机吸入2%七氟醚30 min后，洗脱15 min，然后阻断冠状动脉3 h，再灌注3 h。其余步骤同对照组。吸入麻醉药组在吸入麻醉药期间停用静脉麻醉药，以维持麻醉水平相对稳定。以上各组动物实验完毕后，从心底部剪取各组动物心脏，切下心室，用于总RNA和蛋白提取。
1.3 模型制备 大鼠肌内注射氯胺酮70 mg/kg。颈部正中分离气管并切开插管，动物呼吸机进100%纯氧机械通气，控制呼气末CO2分压在4~4.5 kPa之间。分离颈外静脉置管，持续滴注乳酸林格氏液20 ml/(kg•h)，必要时加少量碳酸氢钠以维持血液pH值在7.35~7.45之间。麻醉维持用微量泵泵注咪唑安定0.05~0.1 mg/(kg•h)，氯胺酮2~5 mg/(kg•h)和维库溴胺0.05~0.1 mg/(kg•h)。分离颈动脉，置管连接换能器测压。正中劈开胸骨，切开心脏，缝线绕过左冠状动脉前降支近端深面并胶管将其套住。拉紧套管即阻断冠状动脉，表现为心肌局部青紫，心电图ST段上升。放松套管，局部反应性充血，表明心肌再灌注。如果发生室颤，用食指轻叩右室壁除颤。, 百拇医药(陈根殷 王旭光 杨 展 陈淑琼)
【关键词】
七氟醚；心肌；心肌再灌注损伤；凋亡
Effected of sevoflurane pretreatment on myocardial Bcl-2 and Bax gene expression during ischemia/reperfusion in rats
, 百拇医药
CHEN Gen-yin,WANG Xu-guang,YANG Zhan，et al.Department of Anesthesiology，First Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang，Guangdong 524001，China
【Abstract】 Objective To investigate the effects ofpretreatment with sevoflurane on myocardial Bcl-2 and Bax gene expression during ischemia-reperfusion in rats.Methods 24 SD rats were randomly divided into 3 groups with 8 animals in each group:sham operation group(group C); ischemia-reperfusion group(group IR)，sevoflurane group(group S).In group IR animals were subjected to 3 h of ischemia by 3 h reperfusion.In group S animals inhales 2%sevoflurane for 30 min followed by 15 min of wash-out before IR.In group C animals underwent no I/R.Myocardium was obtained from marginal zone of ischemic area.The mRNA and protein expression of Bcl-2 and Bax gene were detemined by RT-PCR and western-blot.Results The expression of mRNA and protein expression of Bcl-2 were upregulated in group S and group IR compared with that in group C.The expression of mRNA and protein expression of Bax were down-regulated in group S and group IR.The expression of Bcl-2 gene in group S was higher than tha t in group IR While the expression of Bax gene was lower.Conclusion Sevoflurane pretreatment inhibits myocyte apoptosis inIR myocardiumpartly by modulation of expression of Bcl-2 and Bax genes.
, 百拇医药
【Key words】Sevoflurane；Myocardial；Myocardial reperfusion injury；Apoptosis
研究已表明吸入性麻醉药预处理能模拟缺血预处理效应减轻缺血再灌注所致的心肌损伤[1-3]，但这种心肌损伤保护机制至今尚未完全清楚，有研究证明这与减少缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡的发生有关[4]，但其抑制细胞凋亡的机制至今不甚明确。本研究观察七氟醚预处理对大鼠心脏缺血再灌注过程中心肌细胞Bcl-2及Bax 基因表达的影响，探讨其心肌保护作用机制与凋亡调控基因的关系。
1 材料与方法
1.1 主要试剂和仪器 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、DMSO、DEPC(Sigma公司)；Trizol(Invitrogen公司)；RT-PCR 一步法试剂盒(宝生物(大连)工程有限公司)；GAPDH、Bcl-2、Bax引物(上海生工生物工程技术服务有限公司合成)；100 bp DNA marker、TEMED、6×上样缓冲液(华美生物工程公司)；ECL试剂、Aprotinin(上海华舜生物工程有限公司)；β-actin大鼠多抗IgG、Bcl-2大鼠单抗IgG、Bax大鼠单抗IgG、辣根酶标记山羊抗大鼠IgG(Santa Cruz公司)； PVDF膜 (美国Pall Gelman公司)。
, 百拇医药
1.2 实验分组 健康成年SD大鼠(250~300 g) 24只，雌雄不限，随机分成假手术对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)、七氟醚预处理组(S组)，每组8只。C组不进行缺血再灌注处理。IR组阻断冠脉3 h，随后再灌注3 h。七氟醚预处理组用麻醉机吸入2%七氟醚30 min后，洗脱15 min，然后阻断冠状动脉3 h，再灌注3 h。其余步骤同对照组。吸入麻醉药组在吸入麻醉药期间停用静脉麻醉药，以维持麻醉水平相对稳定。以上各组动物实验完毕后，从心底部剪取各组动物心脏，切下心室，用于总RNA和蛋白提取。
1.3 模型制备 大鼠肌内注射氯胺酮70 mg/kg。颈部正中分离气管并切开插管，动物呼吸机进100%纯氧机械通气，控制呼气末CO2分压在4~4.5 kPa之间。分离颈外静脉置管，持续滴注乳酸林格氏液20 ml/(kg•h)，必要时加少量碳酸氢钠以维持血液pH值在7.35~7.45之间。麻醉维持用微量泵泵注咪唑安定0.05~0.1 mg/(kg•h)，氯胺酮2~5 mg/(kg•h)和维库溴胺0.05~0.1 mg/(kg•h)。分离颈动脉，置管连接换能器测压。正中劈开胸骨，切开心脏，缝线绕过左冠状动脉前降支近端深面并胶管将其套住。拉紧套管即阻断冠状动脉，表现为心肌局部青紫，心电图ST段上升。放松套管，局部反应性充血，表明心肌再灌注。如果发生室颤，用食指轻叩右室壁除颤。, 百拇医药(陈根殷 王旭光 杨 展 陈淑琼)