枸杞多糖与丹参酮延缓小鼠皮肤衰老的实验研究(2)
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1.2.3 皮肤SOD活力测定 参照南京建成生物工程公司SOD试剂盒说明书方法测定SOD活力，单位以U/ ml表示。
1.2.4 皮肤MDA含量测定 硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA含量[2]。
组织中MDA (μmol/g) = (测定管吸光度-测定空白管吸光度)/(标准管吸光度-标准空白管吸光度)×标准品浓度(10 μmol/L)/蛋白含量(g / L)
1.2.5 皮肤羟脯氨酸含量测定参见文献[3]。
1.3 统计学方法 采用SPSS 11.0统计分析软件，计量资料均以均数±标准差x±s表示，多个样本均数的比较用方差齐性检验，当总体方差齐同时选择LDS法分析；方差不齐时选择Dunnet C法分析。P<0.05差异有统计学意义。
2 结果
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小鼠皮肤SOD活力及MDA含量检测结果见表1。小鼠皮下注射D-半乳糖42 d后皮肤SOD活力较正常对照组显著降低(P<0.01)，MDA含量较正常对照组显著升高(P<0.01)，提示造模成功；与半乳糖组相比，枸杞多糖组和丹参酮组小鼠皮肤组织匀浆中SOD含量均明显升高，丹参酮组升高尤为明显(P<0.01)，超过正常组水平，提示丹参酮可明显增强皮肤抗氧化和清除自由基的能力，其作用较枸杞多糖显著；两组小鼠皮肤组织匀浆中MDA含量较D-半乳糖组显著降低，且枸杞多糖组降低较丹参酮组更为显著(P<0.01)，提示枸杞多糖清除过氧化脂质(LPO)能力较VE更强；两组小鼠皮肤组织匀浆中Hyp含量均明显升高，且两组之间没有统计学意义(P>0.05)，说明枸杞多糖和丹参酮均能增强成纤维细胞活性，促进皮肤胶原蛋白合成。
3 讨论
皮肤是最早反应机体衰老的组织，已经引起众多学者对皮肤皱纹、弹性及营养变化等的防治研究[4]，因此预防和延缓皮肤衰老已成为医学和美容的研究热点[5]。本实验结果证实，枸杞多糖和丹参酮均有显著的抗皮肤衰老作用，但枸杞多糖提高D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮肤中SOD活力作用不及丹参酮显著。SOD作为体内天然的抗氧化酶之一，有清除自由基的作用，其活力的提高有益于机体抗氧化能力的[6，7]，其机制可能为丹参酮有明显扩张小血管、抑制血小板聚集、降低血粘度、改善微循环的作用,从而使毛细血管网开放,血流加速,动脉血氧分压和血氧饱和度升高,组织新陈代谢增强,ATP合成增加,促进抗氧化酶类合成,皮肤中SOD活力增强,提高细胞清除H2O2和-O2能力,保护细胞免受自由基损伤,而延缓衰老进程；丹参酮又有Ca2+拮抗剂作用,可阻止Ca2+进入细胞内,抑制黄嘌呤脱氢酶向黄嘌呤氧化酶转变,减少自由基产生；另外,丹参酮又有轻微雌激素作用,对皮肤衰老亦有改善作用。枸杞多糖降低D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮肤中MDA含量作用却较丹参酮显著，其机制可能为枸杞多糖有很强的抗氧化作用，能保护细胞内抗氧化酶类活性，从而阻止多价不饱和脂肪酸的过氧化反应，抑制过氧化脂质生成，维持生物膜正常脂质结构和生理功能而发挥抗衰老作用。枸杞多糖和丹参酮均可使成纤维细胞活性增强,胶原蛋白合成增加,而延缓衰老进程。总之，枸杞多糖和丹参酮均有显著抗皮肤衰老作用,但二者侧重点不同。
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参考文献
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[2] 梁杰,张陈威,李建赤,等.小鼠皮肤超氧化物歧化酶活性与枸杞多糖的干预.中国组织工程研究与临床康复，2007,11(36):7207-7210.
[3] 徐叔云,陈修.药理实验方法学.人民卫生出版社,2002：1464.
[4] Li SP，Zhang GH，Zeng Q，et al.Hypoglycemic activity polysacohadde，with antioxidation，isolated from cultured Cordyceps mycelia.Phytomedicine,2006，13(6)：428-433.PMID:16716913.
, 百拇医药
[5] Kagan VE，Kisin ER，Kawai K，et al.Toward mechanism-based antioxidant interventions:lessons from natural antioxidants.Ann N Y Acad Sci,2002,959:188-198.PMID:11976196.
[6] Lin AD，Mannikarottu A，Kogan BA，et al.Effect of bilateral in vivo ischemia/ reperfusion on the activities of superoxide dismutase and catalase:response to a standardized grape suspension.Mol Cell Biochem，2007，296(1-2):11-16.PMID:17203243.
[7] Li XM，Shi YH，Wang F，et al.In vitro free radical scavenging activities and effect of synthetic oligosaccharides on antioxidant enzymes and lipid peroxidation in aged mice.J Pharm Biomed Anal，2007,43(1):364-370.PMID:16876976., 百拇医药(梁 杰 李 响)