HPLC法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量
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【摘要】 目的 建立HPLC法测定人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量。方法 采用依利特C18色谱柱，甲醇-水(20∶80) 为流动相，流速：1.0 ml/min；检测波长318 nm，柱温为30℃。结果 甲硝唑在0.025~0.150 mg/ml浓度范围内呈良好线性(r=0.999 9)，平均加样回收率(n=6)为100.67%，RSD为0.33%。结论 该方法准确、可靠，与标准法比较，结果较为满意，可用于人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量测定。
【关键词】HPLC法；人工牛黄甲硝唑胶囊；甲硝唑；含量测定
Determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules by HPLC
WU Wei-tao.Anyang Institute for Food and Drug Control，Anyang，Henan 455000，China
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【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules.Methods Elite C18 column was used with a mobile phase composed of methanol-water (20∶80) at a flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was 318nm and the temperature of column was 30℃.Results The calibration curve of metronidazole was linear in the range of 0.025~0.150 mg/ml，r=0.999 9.The average recovery rate was 100.67%,RSD=0.33%(n=6).Conclusion This method is accurate，realiable and can be used for determination of metronidazole in galculus bovis and metronidazole capsules.
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【Key words】HPLC；Galculus bovis and metronidazole capsules；Metronidazole；Content determination
人工牛黄甲硝唑胶囊为复方制剂，是临床常用的一种抗厌氧菌药，主要用于急性智齿冠周炎、局部牙槽脓肿、牙髓炎、根尖周炎等的治疗。国家标准[1]采用紫外分光光度法测定其含量,该方法影响结果因素较多。本文介绍的高效液相色谱法,采用优化的色谱条件,使甲硝唑的含量测定操作简便,专属性高,重现性好,可以替代紫外分光光度法。
1 材料
美国Waters高效液相色谱仪，包括2695型泵，PDA2996型二极管阵列检测器，全自动进样器，柱温箱；Mettler AE-240型电子天平； SECOMAM UVIKON XL型双光束扫描紫外/可见分光光度计。甲硝唑对照品(批号100191-200305，中国药品生物制品检定所)；人工牛黄甲硝唑胶囊(丹东市通远药业有限公司 批号20071111；中诺药业石家庄有限公司 批号08105701；大同市云华药业有限公司 批号080401)。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
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2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱为依利特C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(20∶80)，流速为1.0 ml/min，检测波长318 nm，柱温为30℃，进样量为10 μl。在此条件下，理论塔板数按甲硝唑峰计算不低于10 000，与其他峰的分离度符合要求。色谱见图1。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取甲硝唑对照品25 mg，置100 ml量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5 ml，置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.2 样品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于甲硝唑25 mg)，置100 ml量瓶中，用适量甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀,滤过，精密量取续滤液5 ml，置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为样品溶液。
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2.2.3 空白溶液测试 取流动相经0.45 μm微孔滤膜过滤后进样，结果表明，空白对测定无干扰。
2.3 线性关系 精密量取对照品贮备液2.5，5，7.5，10，15 ml，分别置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得含甲硝唑0.025、0.050、0.075、0.100、0.150 mg/ml的对照品溶液，分别量取10 μl进样，测定峰面积，以浓度(C)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=31 455 221.938 7×C-57 565.324 3，r=0.999 9，线性范围为0.025~0.150 mg/ml。
2.4 精密度试验 在上述色谱条件下，取对照品溶液，重复进样6次。结果峰面积的RSD为0.16%。
2.5 重现性试验 精密称取样品(批号 08105701)5份，按照样品含量测定的方法操作，测得其平均含量RSD为0.09%。
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2.6 加样回收试验 精密称取已知含量的样品(批号：08105701)细粉适量(约相当于甲硝唑25 mg)6份，置于100 ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置于25 ml量瓶中，再分别精密加入“2.2.1”中的对照品贮备液5 ml，加流动相稀释至刻度，摇匀。照样品含量测定项下的方法测定加样回收率，测得甲硝唑的加样回收率(n=6)，结果见表1。
2.7 样品稳定性试验 选定的色谱条件下，每2 h进样一次，8 h内样品中甲硝唑含量测定的RSD为0.36%(n=5)，表明样品溶液在8 h内稳定。
2.8 样品含量测定 按“2.2.2”项下制备样品溶液，经0.45 μm微孔滤膜滤过后取10 μl进样测定，按外标法以峰面积计算。并与国家标准[1]规定的紫外分光光度法(UV法)测定的结果比较。结果见表2。
3 讨论
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3.1 采用二极管阵列检测器，在318 nm波长处主峰有最大吸收，溶剂峰干扰较小，故选为测定波长。流动相的选择是参考文献[2]而确定的，配制简单，此流动相比例能使主峰在较短时间内出峰，且分离较好。
3.2 采用高效液相色谱法，操作简单易行，线性关系良好，结果准确可靠，与紫外分光光度法测定的结果无明显差异，可用于人工牛黄甲硝唑胶囊中甲硝唑的含量测定。
参考文献
[1] 国家药品标准(人工牛黄甲硝唑胶囊).WS-10001-(HD-0204)-2002.
[2] 国家药典委员会.中国药典二部.化学工业出版社，2005:123-124., 百拇医药(吴卫涛)