SATB1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
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张乐 官国先 福建医科大学附属协和医院肿瘤科十四区;
【摘要】目的构建SATB1基因慢病毒载体,为其体内外实验研究提供依据。方法将靶向SATB1基因的shRNA表达序列连接到慢病毒载体pGCSIL-GFP中,获得pGCSIL-GFP-shSATB1质粒,经PCR和测序鉴定后与慢病毒包装质粒pGCSIL-GFP-shSATB1通过Lipofectamine2000共转染至细胞293T,包装产生病毒液,测定其滴度。结果PCR扩增和测序结果证实,SATB1shRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为2×107pfu/ml。结论成功构建人SATB1基因慢病毒载体。
【关键词】 SATB RNA干扰 慢病毒
【分类号】R346
SATB1(Special AT-rich sequence binding protein1)是一种组织特异性的核基质结合区(scaffol/matrix attachment re-gions,S/MAR)结合蛋白。正常情况下,在胸腺细胞和前B细胞中表达显著[1]。最新研究表明乳腺癌组织中有SATB1的异常显著表达,可能为乳腺癌转移机制中的关键蛋白[
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【摘要】 目的 构建SATB1基因慢病毒载体,为其体内外实验研究提供依据。方法 将靶向SATB1基因的shRNA 表达序列连接到慢病毒载体pGCSILGFP中,获得pGCSILGFPshSATB1质粒,经PCR 和测序鉴定后与慢病毒包装质粒pGCSILGFPshSATB1 通过Lipofectamine 2000共转染至细胞293T,包装产生病毒液, 测定其滴度。结果 PCR扩增和测序结果证实,SATB1shRNA 核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为2×107pfu/ml。结论 成功构建人SATB1基因慢病毒载体。
【关键词】 SATB1;RNA干扰;慢病毒
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