ELISA检测弱阳性结果原因分析
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ELISA检测时常出现的弱阳性结果是每个免疫实验室经常遇到的问题,笔者将从以下五个方面进行阐述。
1常见问题
①同一实验室重复结果不一致;②不同实验室结果不一致;③同一实验室不同方法间(如手工与仪器)结果不一致;④准确性问题。
2原因分析
2.1不同方法间以及不同实验室结果不一致:①不同方法灵敏度、特异性差异;②不同实验室使用的试剂差异;③判断标准(CUTOFF)不同;④室间质量评价的作用。
2.2ELISA检测主要影响因素:①标本的质量;②加酶结合物前放置不同时间对竞争法的影响;③不同方法对检测结果的影响;④温育;⑤洗板;⑥CUTOFF值。
2.3可能导致假阳性结果的标本因素内源性干扰因素:如类风湿因子、补体、嗜异性抗体、溶菌酶;②外源性干扰因素:如溶血、细菌污染、标本保存时间过长、凝固不全。
2.4结果不一致另外的主要原因:“张冠李戴”。
2.5实验室操作时差的影响。
3解决方法
3.1标本的处理①做好三查三对,保证标本正确;②“张冠李戴”解决办法:制定规则、质量监督、严格复查、人员固定、适当的工作强度;③离心3000r/min离心10min;④非抗凝血;⑤保证血清清亮、无混浊。
3.2干扰因素的排除①补体干扰的排除:56°加热30min;②类风湿因子的排除:稀释标本,改变酶标抗体;③孵育时间温度一致:37℃水浴箱中温育,每天监测水温、水浴箱中水量,确保水要浸至板条的1/3,均匀孵育,避免边缘效应(见表1)
4结果的解释与报告
4.1弱阳性结果的报告①保存实验记录;②保存标本一周;③根据比较选择CUTOFF值;④使用室内质控;⑤建立SOP杜绝违规操作。
4.2临界结果的处理对策①建立进一步检测的程序;②标本的重复检测;③第二份标本的检测(另取标本);④数周或数月后采取标本检测;⑤可能的话,用另一个更敏感特异的方法检测;⑥检测标准化。
4.3结果的报告①认真阅读试剂盒说明书,按其要求报告结果;②如出现临界结果,应明确进行复查,确定是否需对患者进一步追踪观察;③清楚结果对特定疾病诊断意义(如梅毒抗体),如需进一步检测应在报告中说明。
5需要解决的问题
①标准问题(溯源性,唯一性);②不同实验室比对的问题(结果互认,如何比对);③质控物稳定性问题(如ELISA检测乙肝标志物寿命的问题);④如何对待室内质控和室间质评(稳定性)。
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