过氧化氢对原代人结肠上皮细胞谷氧还蛋白表达的影响(1)
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【摘要】目的采用体外研究方法,探讨过氧化氢(H2O2)对原代人结肠上皮细胞谷氧还蛋白(Grx)表达的影响。方法体外分离培养原代人结肠上皮细胞;通过相同浓度H2O2或不同H2O2浓度刺激原代人结肠上皮细胞,使细胞处于氧化应激状态,应用MTT比色法检测不同浓度的H2O2对细胞活力的影响,半定量RTPCR检测H2O2对细胞Grx基因表达的影响。结果400μmol/L以上的H2O2降低细胞活力;300μmol/浓度的H2O2在一定时间内,随刺激时间的延长,Grx基因表达相应增加(P<0.05),且在各时间点与对照组相比,H2O2组Grx基因表达均显著增加,在30min时表达量最多;在300μmol/L以下,随着H2O2浓度的增加,Grx基因表达水平亦相应增加(P<0.05);而500μmol/L浓度的H2O2组Grx基因表达与400μmol/L组相比有所下降(P<0.05)。结论H2O2引起的氧化应激可明显上调原代人结肠上皮细胞Grx基因的表达,可能在基因水平上参与了对抗H2O2的的作用,但另一方面也赋予了细胞良好的抗凋亡能力,值得深入探讨。
【关键词】过氧化氢;谷氧还蛋白;氧化应激;原代人结肠上皮细胞
结肠癌是威胁人类健康的最常见肿瘤之一,目前为止其发生和发展机制尚未完全阐明。已有研究表明,过氧化氢(H2O2)等活性氧引起的氧化应激在结肠癌的发生发展中起着重要作用,而谷氧还蛋白(Grx)参与了细胞内氧化还原状态的维持,且可能在细胞内氧化还原状态的调控以及抵抗氧化应激过程发挥重要作用。但H2O2引起的氧化应激是否对人结肠上皮细胞Grx产生影响至今未见报道。所以本实验以原代培养的人结肠上皮细胞为研究对象,观察氧化应激是否可引起细胞Grx的高表达,试图为探讨结肠癌的发病机制和治疗提供一定的理论依据。
1材料与方法
1.1原代人结肠上皮细胞的培养参照文献的方法培养人原代结肠上皮细胞 ......
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