食管癌患者手术前后免疫相关差异表达基因的筛选
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摘要：目的采用抑制消减杂交技术，分析食管癌手术前后免疫相关的基因表达差异，了解手术治疗对食管癌患者免疫功能的影响。方法选5例食管肿瘤患者，在手术治疗前和结束时每例患者分别取10血外周静脉血，样本采集后马上进行外周血单个核细胞(PMBC)分离及提取RNA。分为2组，手术前组和手术后组。每组5个人的RNA混合后做cDNA合成。治疗后组和治疗前组进行正向比较，cDNA经两轮杂交与PCR扩增后T/A克隆构建文库，并对克隆进行PCR扩增，选取部分阳性克隆测序，与GenBank同源比较，分析其生物学意义。结果用SSH法建立食管癌手术前后免疫相关的差异表达基因的cDNA文库，通过筛选，发现在食管癌手术后，含有与免疫相关的基因，如IL-2、化学趋化因子受体4等表达较前增强，提示食管癌手术改善患者的免疫功能。另外还发现肿瘤相关基因CHES1表达较前增强，另外还发现了3个未知序列。结论成功通过SSH建立了食管癌手术前后免疫相关的差异表达基因的消减文库，核酸序列分析结果表明其中部分基因为与炎症相关的基因，部分基因与癌症形成相关，还发现了一些未知序列。
关键词：食管癌；抑制消减杂交技术
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