急性黄磷及其化合物吸入致ALI/ARDS大鼠HSP70的表达及肺组织病理改变(2)
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1.2.1 动物模型的建立 各组大鼠除对照组外,均参考文献方法[3,4],采用周身暴露式染毒,建立大鼠急性吸入黄磷及其化合物中毒致ALI/ARDS模型,具体步骤为:将50 g黄磷,50 g氢氧化钠放入盛有200 ml 50℃水的 1000 ml烧瓶中加热。染毒柜为30 cm×40 cm×50 cm,内置气体混匀装置,染毒柜下方开一直径1.5 cm孔,经橡皮管连接烧瓶。加热30 min后,见染毒柜中充满毒气,迅速拉开盖子,将一个时间点5只大鼠置入。染毒10 min,将大鼠取出,呼吸空气5 min,再置入染毒柜10 min。同法染毒6次,间隙5次,染毒方式为10-5-10-5-10-5-10-5-10-5-10(min)。总染毒时间为60 min,整个染毒过程中,各装置均持续工作。对照组采取类似方法,但无气体发生(不放入产气原料)。染毒后,将大鼠腹腔注射10%水合氯醛(4 ml/kg)麻醉,选择一侧颈总动脉抽血作血气分析,动脉血氧分压(PaO2)低于60～65 mm Hg时,既视为造模成功。
1.2.2 动物分组
将健康SD大鼠48只(雌雄各半),适应性喂养3 d后,随机分为对照组以及造模后0、4、12、24、48 h处死组,每组8只。
1.3 检测指标
1.3.1 一般情况 造模后开始观察大鼠精神状态,呼吸,活动情况。
1.3.2 肺系数测定 以全肺湿重与该大鼠体质量之比即为肺系数。
1.3.3 肺组织病理检查 肺组织置同一固定液固定12～24 h,取右肺中叶组织,常规石蜡包埋、切片,用于HE染色、光镜观察。
1.3.4 肺组织HSP70免疫组化检测 病理切片经免疫组化常规处理后滴加小鼠抗HSP70抗体,滴加生物素化山羊抗小鼠IgG,滴加试剂SABC,然后DAB显色,最后图象在显微镜下行光密度分析。
1.3.5 显微镜下光密度分析步骤 在40×10倍光学显微镜下,每张切片随机选取5个区域(视场),每个视场选取5个阳性表达区域测量平均光密度(光密度数值与HSP70表达程度成反比)。
1.4 统计学方法 所有数据用均数±标准差(x±s)表示,采用完全随机的单因素方差分析,用t检验比较各均数相差的显著性,以P<0.05为差别有统计学意义。
2 结果
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