同种异体骨髓基质干细胞移植对兔激素性股骨头缺血性坏死血清肿瘤坏死因子α的影响(2)
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参见附件。
1.2.3 MSC移植 治疗组双侧股骨头均参加实验。第6周,动物被俯卧位固定,3%戊巴比妥钠静脉麻醉,后侧入路暴露股骨头,用直径3.5 mm钻头从股骨颈的内后侧向股骨头内钻入 4 mm,到达关节软骨下,植入含有体外培养的同种异体MSC的明胶海绵,关闭伤口。术后连续3 d于臀大肌注射硫酸庆大霉素,每只每次8万U,1次/d,预防术后感染。
1.3 观测指标
1.3.1 动物一般情况 观察试验动物的精神,体质量,饮食,活动,尿便,毛发情况以及动物的死亡情况。
1.3.2 股骨头标本大体观察 观察股骨头外形及关节软骨面的颜色、光滑度。
1.3.3 病理组织学检查 光镜观察骨组织、骨髓组织、骨小梁及髓内脂肪组织的变化。
1.3.4 兔血清TNF-α水平测定 第10周每组动物均采用耳中央动脉取血,每只2 ml,15000 r/min,离心10 min,4℃,取上清,- 20℃保存,采用ELISA 法测血清中TNF-α的浓度。
1.4 统计学方法 实验数据用秩和检验进行统计学处理。以P<0.05或P<0.01为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 动物一般情况观察 造模1周后体质量下降,食欲亢进,逐渐出现精神差、少食、少动,反应淡漠,皮毛失去光泽、皮下脂肪减少,至第6周时更加明显,体质量平均下降0.43 kg。其中模型组在用醋酸泼尼松龙后2周内死亡3只;治疗组在用醋酸泼尼松龙后2周内死亡2只,移植MSC后因感染死亡1只。所有存活动物无皮肤溃烂、感染。
2.2 股骨头标本大体观察 所有实验动物的股骨头、颈外形完整,软骨面平整光滑,色透明。
2.3 病理组织学观察 空白组:骨小梁完整,排列规则,骨小梁中的骨细胞清晰可见,空骨陷窝少见,骨髓中造血细胞丰富,脂肪细胞相对较少,形态正常;模型组:骨小梁变稀疏细且断裂成片状,骨小梁中骨细胞空陷窝增多,骨细胞核固缩,骨髓腔内造血组织明显减少,细胞数目及网状结构较正常稀疏,脂肪细胞体积增大,有的融合成大泡状;治疗组:缺损区有少量骨髓基质干细胞, 成骨细胞增生活跃, 可见一些网织骨的骨髓组织, 边缘骨小梁周围有大量成骨细胞 ......
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