白介素-17对急性肺损伤小鼠中性粒细胞凋亡的影响(2)
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参见附件。
1.3 取材方法 造模成功后24 h取材,小鼠经眼球摘除法取血,一部分经EDTA抗凝处理后待上流式细胞仪检测,一部分不予抗凝处理,常温下,予离心机内3000转/min,10 min,分离血清,待测。
1.4 测试指标及方法
1.4.1 肺组织直接光镜观察
1.4.2 中性粒细胞凋亡 取抗凝全血100 μl 应用Annexin Ⅴ-FITC凋亡试剂盒(使用方法按试剂说明书进行),经流式细胞分析仪检测,应用CELL Quest多功能主软件获取并分析细胞,在中性粒细胞门内获取一万个细胞,分别记录AnnexinⅤ及PI百分比 。
1.4.3 淋巴细胞CD3+/4+/8+分类检测 取抗凝血100μl,应用Rat anti-Mouse CD4/CD8 mAb, FITC/PE试剂盒(使用方法按试剂说明书进行),经流式细胞分析仪检测,应用CELL Quest多功能主软件获取并分析细胞,在淋巴细胞门内获取1万个细胞,记录CD4+百分比。
1.4.4 IL-17应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-17含量,方法按产品说明书进行。
1.5 统计学方法 应用SPSS 13.0软件进行分析,采用t检验法进行分析,P<0.05差异有统计学意义。
2 结果
2.1 中性粒细胞凋亡百分比(表1) 模型组中性粒细胞百分比明显高于对照组,P<0.01。
2.2 CD4+百分比计数(表2) 模型组CD4+细胞的表达明显高于对照组,P<0.01。
2.3 IL-17含量(表3) 模型组IL-17含量高于对照组,P<0.05。
表1
两组中性粒细胞凋亡情况
组别中性粒细胞凋亡百分比(%) P值
对照 0 ......
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