氨基胍对糖尿病大鼠非酶糖化和细胞凋亡的影响(2)
| 第1页 |
参见附件。
2.3 标本的留取 灌胃16周后,禁食12 h,断尾测空腹血糖。腹腔注射10%水合氯醛(按400 mg/kg体重)麻醉大鼠。迅速摘除双侧肾脏,取左肾少量皮质,切成约1 cm3左右小块,放入3%戊二醛4℃固定,进行透射电镜观察。取左肾剩余皮质称重,置于-70℃冰箱保存,进行AGEs含量测定。取右肾组织放于4%中性甲醛中固定,进行免疫组化染色。
2.4 透射电镜样品制备[3] 将3%戊二醛固定的肾脏标本常规脱水、包埋、聚合、切片、电子染色,透射电镜下观察并拍照。
2.5 免疫组织化学染色 按常规ABC法进行免疫组化染色,显微镜观察阳性信号,以细胞浆和/或细胞膜染成黄棕色作为Bcl-2阳性信号,细胞浆染成黄棕色作为Bax阳性信号。
2.6 肾皮质AGEs测定 参照Tina Soulis-Liparota [4]的方法:将肾皮质剪碎制成匀浆,去脂,冲洗,Ⅳ型胶原酶、蛋白酶K消化处理,离心后的上清液即为被胶原酶消化的肾皮质胶原液;上清液用蒸馏水稀释一倍,避光静置1 h后用荧光分光光度计按370/440nm(激发波/发射波)测定荧光值,以含胶原酶的HEPES缓冲液荧光值为1个任意荧光单位(AUF),样品荧光强度依此折算;用氨胺T氧化法进行羟脯氨酸含量测定,将测得的羟脯氨酸值乘以因子7.14,即为胶原含量。最后肾皮质中AGEs含量以每毫克胶原中相对荧光强度(AUF/mg)表示。
2.7 统计学方法
所测数据结果以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS 11.5统计软件包处理,对组间数据进行方差分析,P值<0.05为有统计学意义。
3 结果
3.1 血糖情况 对照组大鼠的空腹血糖保持正常, 糖尿病组、氨基胍组大鼠处于持续的高血糖状态,血糖水平比对照组明显升高(P<0.01),而糖尿病组与氨基胍组血糖水平无显著差异 (P>0.01)(见表1)。
3.2 透射电子显微镜观察
电镜下可见CON大鼠肾小管上皮细胞细胞膜完整,细胞器丰富,线粒体良好无肿胀。糖尿病组大鼠肾组织细胞核内染色质趋边浓缩、聚集、细胞核周间隙增宽,细胞线粒体明显肿胀,细胞质吞饮泡大量增多,上皮细胞内可见凋亡小体 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。