RP-HPLC法测定糖尿病患者红细胞膜磷脂酰胆碱含量(1)
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【摘要】 目的 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定糖尿病患者红细胞膜磷脂酰胆碱含量。方法 色谱分析条件:Shim - pack VP-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm) ,以乙腈∶甲醇∶85%磷酸(100∶10∶1.8)为流动相,等速洗脱,流速1 ml/min,检测波长203 nm,柱温30℃。结果 磷脂酰胆碱线性范围为0.1～1.0 mg/ml(相关系数r=0.9985),平均回收率97.2%,糖尿病并发症患者红细胞膜磷脂酰胆碱含量较正常人明显降低。结论 本方法重现性好,适用于测定红细胞膜磷脂酰胆碱的含量。
【关键词】糖尿病;红细胞膜;反相高效液相色谱法;磷脂酰胆碱
红细胞膜磷脂成分的改变与糖尿病微血管病变有着密切的关系[1-4]。因此,对糖尿病患者红细胞膜磷脂组成成分的分析显得尤为重要。高效液相色谱法(HPLC)测定磷脂成分操作简便、省时,而且定量准确,具有方便、快速、高灵敏度、无损伤的特点[5]。本文首次采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定了糖尿病患者红细胞膜磷脂酰胆碱的含量,为进一步研究糖尿病患者红细胞膜磷脂组成奠定基础。
1 研究对象、实验仪器与材料
1.1 研究对象正常对照组:健康志愿者40例(男18例,女22例),空腹血糖(FBG)<6.1 mmol/L,葡萄糖耐量试验(OGTT)正常且无肾脏疾病;年龄(50±10)岁。 糖尿病(DM)无并发症组:由宁夏医科大学附属医院根据WHO标准确诊的DM患者45例(男21例,女24例),年龄(50±10)岁,眼底荧光造影正常,尿白蛋白排泄率(UAER)<20 μg/min。 糖尿病(DM)并发症组:患者25例(男9例,女16例),年龄(60±10)岁,眼底检查均有不同程度的视网膜病变和6 个月内连续两次24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)>20 μg/min,并排除由心脏、肝脏、肾脏及其他全身疾病或应用影响肾功能药物引起蛋白尿者。病程>10年。
1.2 实验仪器与材料 CBM220A高效液相色谱仪(日本岛津公司),SPD220A检测器,二元梯度泵, LC-Solution色谱工作站,Milli-Q A10型纯水仪(M ILL IPORE),超速冷冻离心机,台式低速离心机 ......
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