异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞增殖和活力的影响(2)
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参见附件。
1.2.4 细胞活性测定 (LDH活力测定)比色法,按试剂盒说明书。取对数生长期的HSC用0.25%胰酶消化成细胞悬液,以含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液稀释成100个/ml,以每孔2 ml接种于24孔培养板。37℃,5%CO2培养箱培养至细胞70%融合时,用无血清DMEM洗涤细胞2次,再用含0.5%胎牛血清DMEM同步过夜,然后分为5组,一组为对照组;其余四个实验组分别加入终浓度为0.01,0.1,1,10 mg/ml的MgIG溶液,每一浓度设6复孔,继续培养24 h,收集每一孔上清液。每孔样品取样量15 μl,按试剂盒步骤操作,酶联免疫检测仪测定在492 nm波长处的吸光度(OD值)。
1.2.5 细胞形态学观察采用倒置生物相差显微镜,观察各加药组的第1、2、3天细胞形态学变化。
1.2.6 统计学分析 采用SPSS13.0软件,进行方差分析与配对t检验。
2 结果
2.1 MgIG对HSC增殖的影响 MTT法检测药物对细胞增殖活性的影响。实验结果显示与对照组比较,10 mg/ml的MgIG对HSC的体外生长抑制作用有非常显著差异(P<0.01),增殖率为对照组的64.84%,1 mg/ml 的MgIG对HSC的体外生长抑制有一定作用,增殖率为对照组的85.5%,差异有显著性(P<0.01),0.01、0.1 mg/ml的MgIG对HSC的体外生长无明显抑制作用(P=0.312和P=0.067),增殖率分别为对照组的93.86%和96.69%(表1)。
注:*与1、2、3、4组比较,差异有显著性;#与1、5组比较,差异有显著性(P<0.05)
2.2 MgIG对HSC活力的影响 为检测不同浓度的MgIG对HSC活力的影响,将HSC与不同浓度组的MgIG共同孵育24 h,倒置显微镜下,各组细胞生长良好,细胞形态正常,核膜完整,无细胞脱失区。除了10 mg/ml MgIG给药组上清液有极少量死细胞浮起外,其余3个浓度的甘草酸给药组上清液未见有死细胞浮起。测定了各给药组上清液中LDH活力测定。结果显示各浓度组的MgIG给药组上清液中LDH活力无明显差异(P>0.05)(表2) ......
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