骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体修复大鼠桡骨缺损的放射学研究(2)
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1.3 实验结果检测
1.3.1 术后动物生活状态的观察 手术后观察动物的饮食与活动状态以及伤口的愈合情况。
1.3.2 X射线检测缺损修复情况 于手术后第2、4、8、12周每种浓度各取3只大鼠,骨缺损区正位行X光拍片并按照Gray[4]标准进行结果分析。
1.3.3 Ⅰ型胶原蛋白的免疫组织化学染色 取上述2、4、8、12周各时间点的组织包块,作8 μm厚切片。按照产品说明书,将石蜡切片脱蜡至水,3%H2O2室温孵育,以消除内源性过氧化物酶。经pH 6.0的枸橼酸缓冲液中行抗原热修复,5%正常山羊血清封闭后加入1:100稀释的一抗(Ⅰ型胶原蛋白),4℃过夜。滴加生物素标记的二抗37℃孵育30 min,滴加ABC试剂37℃孵育30 min后DAB显色,常规脱水,透明,封片。以上各步骤军用PBS冲洗,同时用PBS代替一抗设置阴性对照。并对免疫反应结果作图像分析,测定平均灰度值。
1.4 统计学分析 实验所得数据以均数±标准差(x±s)表示。两组间比较采用q检验。P<0.05认为差异有显著性。采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。
2 结果
2.1 大体观察 除B组有1例动物因麻醉过深死亡外,其余动物于术后2 h完全清醒,术肢活动受限,饮食明显减少。1 d后术肢跛行减轻,饮食稍有增加。伤口无红肿、渗出现象,1周后术肢跛行消失,伤口均Ⅰ期愈合,饮食及活动完全恢复正常。
2.2 各组术后各时间段骨缺损区X射线片下表现 ①实验组A:2周桡骨缺损处略见骨痂形成,影像成薄云雾状(图1a)。4周缺损区两端可见明显的新生骨痂(图2a)。8周整个缺损区均可见新生骨痂且新骨密度增高,明显形成骨缺损区的桥接(图3a)。12周骨缺损区完全被新生骨组织填充,影像基本与自体骨一致,已有骨髓腔出现(图4a);②对照组(B、C组):E组:2周骨缺损区无明显变化(图1b)。4周仅在两断端有少量的云雾状骨痂形成(图2b)。8周缺损区仍然是仅在两断端有少量的云雾状骨痂形成,缺损区中央部分仍无明显骨形成影像(图3b) ......
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