高效液相色谱法测定盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的含量
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【摘要】 目的 建立测定盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的含量的HPLC方法。方法 采用ODS柱,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲溶液(取磷酸铵2.75 g,加水950 ml,用磷酸调节pH值至2.4,补水至1000 ml,摇匀)(梯度洗脱);检测波长282 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃。结果 盐酸多巴酚丁胺的在浓度93.4~934 μg/ml与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.9%,RSD为0.11%。结论 所建立的方法简便易行,准确可靠,可用于盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺的含量测定。
【关键词】盐酸多巴酚丁胺;高效液相色谱;梯度洗脱
Determination of Dobutamine Hydrochloride in Dobutamine Injectionby HPLC
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of dobutamine hydrochloride in dextrose injection.Methods An ODS column was used with the mobile phase of acetonitride-phosphate buffer(Dissolve 2.75 g of phosphate amine in 950 ml of water.Adjust the solution with phosphoric acid to a pH of 2.4,dilute with water to 1000 ml,and mix.),gradient elution,at the detection wavelength of 282 nm and flow rate of 1.0 ml/min,and the column temperature was 30℃.Results The calibration curves of dobutamine hydrochloride was linear in the range of 93.4~934 μg/ml.The average recovery was 99.9%(RSD 0.11%).Conclusion This method is accurate,sensitive and reproducible.It can be used for the dobutamine hydrochloride assay in dobutamine injection.
【Key words】Dobutamine hydrochloride; HPLC; Gradient elution
作者单位:415500湖南省澧县人民医院药剂科
盐酸多巴酚丁胺属β肾上腺素受体激动药,用于治疗各种不同原因引起的心肌收缩力衰弱的心衰,如冠心病引起的急性心肌梗死泵衰竭,扩张型心肌病,风湿性瓣膜病引起的心衰,心脏直视手术后所致的低排血量综合征以及难治性心力衰竭等[1,2]。目前对多巴酚丁胺含量测定的报道比较少,中国药典2000年版二部曾收载本品,采用非水滴定法测定本品的含量[3]。为了有效控制盐酸多巴酚丁胺注射液的质量,我们参考有关文献[4,5]并改进,通过实验摸索,运用HPLC法对盐酸多巴酚丁胺注射液中盐酸多巴酚丁胺进行测定,现报告如下。
1 仪器与试药
Waters-2690及其色谱工作站(美国Waters),配备紫外检测器。UV-2550紫外可见分光光度计(日本岛津)盐酸多巴酚丁胺对照品(D-060102,含量99.2%,上海紫源制药有限公司);盐酸多巴酚丁胺注射液[20 mg/2 ml(按多巴酚丁胺计),湖南中南科伦药业有限公司,批号:070921、070922、070923]。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱Waters Symmetry C18(5 μm 4.6×250 mm),以乙腈为流动相A,以磷酸盐缓冲溶液(取磷酸铵2.75 g,加水950 ml,用磷酸调节pH值至2.4,补水至1000 ml,摇匀)为流动相B,梯度洗脱(梯度洗脱方式见表1);流速1.0 ml/min;检测波长282 nm;进样量10 μl,柱温30℃。
表1
梯度洗脱时间表
时间(min)流动相A(%)流动相B(%)
01684
103565
10~253565
2.2 溶液配制
2.2.1 对照品溶液 精密称取对盐酸多巴酚丁胺照品适量置50 ml量瓶中,加水适量溶解并稀释成0.4 mg/ml的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液 精密量取本品2 ml,置25 ml量瓶中,加水定容,摇匀,即得。
2.2.3 空白样品溶液 按本品处方,制备成缺盐酸多巴酚丁胺的阴性样品,然后按“2.2.2”项下方法制备成阴性样品溶液。
2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl进样测定,在“2.1”项下色谱条件下,其他物质对盐酸多巴酚丁胺无影响,分离度>1.5,按盐酸多巴酚丁胺计理论塔板数>5000,典型色谱图见图1,空白辅料不干扰测定。
A对照品 B阴性对照品C样品
图1 盐酸多巴酚丁胺HPLC图
2.4 线性关系考察 以水为溶剂,分别配制对盐酸多巴酚丁胺照品浓度(C)为每1 ml中含93.41、186.82、280.23、373.64、467.10、560.46、747.28、934.10 μg的溶液分别进样,以浓度C对峰面积A进行回归,得的盐酸多巴酚丁胺线性方程为A=-77.31+16.23C,r=0.9999。结果表明:本品在93.4~934.1 μg/ml浓度范围内A与C成良好的线性关系。
2.5 稳定性试验 精密吸取同一批供试品溶液分别于0、1、2、4和8 h进样,测得含量的RSD为0.45%,表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.6 精密度试验 取同一批供试品溶液连续进样6次,测得盐酸多巴酚丁胺含量的RSD为0.17%。
2.7 重复性
取同一批号样品6份,按“2 ......
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