高效液相色谱法测定清脑降压片中黄芩苷的含量
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【摘要】 目的建立清脑降压片中黄芩苷的含量测定方法。方法 采用RP-HPLC法进行测定,色谱柱为Dikma C 18 (5μm,250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2),检测波长为280nm,柱温:25℃。 结果 清脑降压片中黄芩苷的的线性范围为3.28～52.48μg•ml-1,r=0.9999,平均回收率为 95.3%,RSD值为1.22%。结论该方法简便,结果准确,重现性好,可作为清脑降压片的质量控制方法。
【关键词】 清脑降压片;黄芩苷;高效液相
The highly effective liquid phase determination qingnao jiangya tablet of Baicalin’s content
【Abstract】 Objective Establishes with the opposition highly effective liquid chromatography (RP-HPLC)determination qingnao jiangya tablet of Baicalin’s content method. Methods Uses RP-HPLC to dectect, chromatograph Volume was Dikma C18 (5μm,250 mm×4.6 mm), Mobilephase:Methanol-water-Phosphoric acid (47:53:0.2); Dectectwavelength is 280nm;The temperature of chromatopraph volume was 25℃. Results The Baicalin linear scope 3.28～52.48μg/ml (r=0.9999), (r=0.9999) The average recoveries were 95.3%, and the RSD were 1.22%.Conclusion These methods can be used for quality control of qingnao jiangya tablet.
【Key words】 Qingnao jiangya tablet; Baicalin; HPLC
作者单位:418000湖南省怀化市中医院
清脑降压片由黄芩、夏枯草、槐米、牛膝、水蛭等十三味中药组成,具有平肝潜阳之功效。用于肝阳上亢所至的眩晕等证[1]。而本品现行的检验标准中[2]对黄芩苷的质量控制尚无定量。为更好的控制本制剂质量,本文参照文献并适当改进[3-6],采用HPLC法测定控制该品种中黄芩苷的含量。
1 仪器与试液
a) LC-10ATVP高效液相仪,岛津SPD-10AVP紫外检测器,浙大N3000工作站(日本岛津),AB135-S电子分析天平(瑞士梅特勒);湘仪AEU-210电子分析天平,岛津紫外UV-2401(日本岛津)。清脑降压片(伊春药业有限公司,规格:0.55 g/片,批号:20090101、20090208、20090318),黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号:0796-200208),甲醇(色谱纯,TEDIA),磷酸(色谱纯,TEDIA),乙醇(分析纯,湖南师大试剂厂),水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Dikma C18(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相:甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2); 检测波长为280nm;流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;进样量:10ul。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取经五氧化二磷干燥24 h的黄芩苷对照品6.56 mg,置于100 ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得65.6 ug/ml储备液。
2.2.2 供试品溶液 取本品20袋,研细,取供试品0.8 g,精密称定,置100 ml锥形瓶中,加70%甲醇40 ml,称定重量后置水浴上加热回流1.5 h,取出,冷却至室温,滤过,滤液至100 ml量瓶中,用少量70%甲醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%甲醇至刻度,摇匀,即得。
2.2.3 阴性对照液 取除黄芩以外的其他十二味药材按处方制备成缺黄芩样品,再按“2.2.2”项下方法制备。
2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照液注入色谱仪,记录色谱图,从图1中可以看出,黄芩苷与其相邻峰完全分离,阴性对照色谱图在对应的黄芩苷峰位置处无干扰峰,即表明其他组分对测定无干扰。黄芩苷峰与其他组分峰的分离度都大于1.5。理论板数按黄芩苷计算应不低于2500。对照品液相色谱图见图1 A,样品液相色谱图见图1 B;阴性对照色谱图见图1 C。
图1 黄芩苷色谱图
2.4 标准曲线的制备 精密吸取储备液0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 ml分别置10 ml量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,即得系列标准溶液。分别取系列标准溶液10ul进样,记录色谱图,由峰面积(Y)(n=3)对响应的浓度(X)直线回归,黄芩苷回归方程为:Y=57468.2X-1152.6,r=0.9999,表明黄芩苷在3.28～52.48μg/ml的浓度范围内线性相关。
2.5 精密度考察 取同一对照品溶液连续进样6次,进样量10μL, 测定峰面积,计算RSD值为0.98%。结果表明仪器与色谱条件具有良好的精密度。
2.6 重复性试验 取同一批号(批号:20090101)的供试品6份,按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,分别精密吸取各供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪,测定峰面积,结果黄芩苷含量RSD为0.95%。
2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(批号:20090101),在0、2、4、6、8、10 h分别进样10μL,依法测定,结果6次测定的黄芩苷峰面积RSD为1 ......
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