正交试验法优选金樱叶总黄酮提取工艺(2)
 |
| 第1页 |
参见附件(1915KB，3页)。
2.4.5 稳定性试验 取适宜浓度的芦丁标准品溶液5.0 ml置50 ml容量瓶中,加入5%的亚硝酸钠溶液1 ml, 摇匀,6 min后,加入10%的硝酸铝溶液1 ml,摇匀,6 min后,再加入4%的氢氧化钠溶液10 ml,加水稀释至刻度,摇匀后,静置15 min。以试剂为空白参比液,置紫外分光光度计UV-1102在509.5nm处测得吸光度值,以显色15 min后的时刻设为0时刻,得出结果(见表2)。
由表2得,RSD%为1.94%,说明芦丁的显色反应的稳定性良好,样品溶液应在显色后三小时内完成含量测定。
2.4.6 加样回收率 取0.5 g/份金樱叶粉末共6份,按含量测定结果,1∶1加入芦丁对照品(与样品中黄酮量1:1),按提取方法提取,过滤,取滤液,按“2.4.3”项下方法操作测定吸光度,并计算总黄酮量。计算所得平均回收率为99.7%,RSD%为2.4%。结果如下(见表3)。
2.5 正交试验结果
精密称取脱脂金樱叶粉末每份0.5 g按L9 (34)正交设计设计方案进行试验,所得提取液抽滤,定容至50 ml容量瓶中,摇匀,制得9个供试品溶液,测定9个样品的吸光度,根据标准曲线计算样品含量(见表4)。
试验结果表明,各因素对提取效果的影响从大到小依次为乙醇浓度、固液比、提取时间、超声功率。由表4中R值可得出:乙醇浓度和固液比为主要影响因素,提取时间和超声功率为次要影响因素。最佳的超声提取工艺条件为A1B2C2D2和A1B3C3D3,计算所得的最优工艺为A1B2C3D2。从表4中可得因素B的R值为0.394, 影响不大;而因素C优选的2个工艺结果相差并不大,但就工业生产成本而言,时间越少,对工业生产越有利,成本也相对减少;而因素D的极差值R较大,表明固液比对提取的影响较大,但溶剂的减少可以避免造成浪费,也可以节省成本开支。因此,从省时、省能等方面出发,综合各种因素,得出最佳的总黄酮提取工艺为A1B2C2D2,即为1:40的固液比下,超声频率为28KHz,90W功率下,以浓度为50%的乙醇超声提取60 min。
2.6 验证实验 按照A1B2C3D2 进行验证试验,由表6中结果看,RSD%为1.97%,实验证明本实验的所得的提取工艺重复性良好。
3 讨论
本实验选用硝酸铝试剂进行黄酮的显色反应,而试验结果表明,芦丁的显色反应稳定性好,可选用芦丁作为对照品。本实验用超声提取的方法提取,经过预试验选出,预试验中,用超声法提取金樱叶,总黄酮的提取量比回流提取法的提取量稍多,且超声提取法与回流提取法相比,提取时间较少,操作较方便。
由于金樱叶是常绿植物,含有大量的叶绿素,叶绿素的存在,不仅会造成视觉上无法判断黄酮的存在与否,甚至可能会影响黄酮在紫外下的测定结果。浓度越大的乙醇所提取出的叶绿素也越多,叶绿素的存在令提取液的颜色变成绿色,难以判断黄酮的存在,也影响显色结果。综合因素,实验前去除金樱叶中叶绿素,减少影响因素是必要的。
经过多次实验,利用单因素实验和正交试验法得到一个可行的金樱叶总黄酮提取工艺:以50%的乙醇作为提取溶剂,以1:40的固液比,在超声28KHz、90W条件下进行超声60 min,总黄酮得率为11 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1915KB，3页)。