还原型谷胱甘肽对糖尿病大鼠视网膜病变干预研究(1)
【摘要】 目的探讨糖尿病视网膜病变与诱导型一氧化氮合酶的表达的关系并探讨还原型谷胱甘肽对诱导型一氧化氮合酶表达的影响以及对糖尿病视网膜病变的防治作用。 方法雄性SD大鼠70只随机分成对照组10只,糖尿病1、3、6月组以及还原型谷胱甘肽干预3、6月组各12只。分别留取视网膜标本,部分标本观测视网膜病理改变;部分标本采用免疫组化法测定诱导型一氧化氮合酶表达。 结果视网膜病理结果显示:与正常对照组相比,糖尿病1、3、6月组视网膜病理改变逐步加重;免疫组化分析结果显示诱导型一氧化氮合酶表达在糖尿病各组均明显增强( P <0.05),干预组较糖尿病各组均有明显改善( P <0.05)。 结论糖尿病视网膜病变早期就出现视网膜诱导型一氧化氮合酶表达增强,且随着视网膜组织病理学改变而持续活化。还原型谷胱甘肽有效抑制了诱导型一氧化氮合酶表达,从而达到视网膜保护的目的。
【关键词】
还原型谷胱甘肽;视网膜;糖尿病;诱导型一氧化氮合酶
Activation of iNOS in the Retina of Diabetic Rat is Regulated by Glutathione
DI Hongjie,WANG Xiaochao,LIU Kemian.Department of Endocrinology,Jiangsu Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Nanjing 210028,China
【Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression of retina inducible isoform of nitric oxide synthase(iNOS)at different stage of Diabetic Rats and the effects of glutathione(GSH)on diabetic retinopathy. Methodsand Methods:Seventy SpragueDawley rats were randomly divided into control group、diabetic group and glutathione treatment group.Diabetic model of rat was induced by injecting streptozotocin(STZ).The morphology in retinal paraffin slide was observed by microscope.The expression of iNOS was detected by immunohistochemistry. ResultsHistopathology was detected at 3 months.The change of histopathology is severe at 6 months than at 3 months.1 months of diabetes in rats resulted in retinal iNOS activation(as detected by immunohistochemistry),and iNOS remained activated at 3 and 6 months of diabetes.Glutathione inhibited elevations of iNOS expression,without ameliorating the severity of hyperglycemia. ConclusioniNOS is activated in retina in diabetes before histopathology can be seen,and remains activated for the duration when the retinopathy is developing.Glutathione might be inhibiting the development of retinopathy by inhibiting iNOS activation.
【Key words】
Glutathione;Retina;Diabetes;Inducible isoform of nitric oxide synthase(iNOS)
作者单位:210028 江苏省中西医结合医院内分泌科
糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见和最严重的并发症之一,其已成为大多数发达国家工作年龄人群致盲的首要原因[1]。
一氧化氮(NO)能调节许多重要的生理过程,包括神经传递、血管舒张等,是视网膜血管功能的重要调节因子,在糖尿病视网膜病变患者及动物模型中都发现一氧化氮水平升高。一氧化氮合酶催还L精氨酸生成一氧化氮,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生过多的一氧化氮已经被证明在包括糖尿病视网膜病变在内的许多眼科疾病中发挥重要作用。
本实验旨在探讨糖尿病视网膜病变与iNOS的表达的关系并探讨还原型谷胱甘肽对iNOS表达的影响以及对糖尿病视网膜病变的防治作用。
1 材料和方法
1.1 糖尿病动物模型的建立及分组 实验动物为生后6周、体重180~200 g的雄性SD大鼠70只,本院实验动物部提供。大鼠随机分成对照组10只,糖尿病组36只(1、3、6月各12只),干预组24只(3、6月各12只)。糖尿病组、干预组鼠按60 mg/kg的剂量一次性腹腔内注射链脲佐菌素(STZ,美国Sigma公司),3 d后使用血糖仪(强生公司稳豪型)测空腹血糖达16.6 mmol/L以上,且尿量及饮水明显增多鼠为糖尿病大鼠模型。对照组仅腹腔内注射同样体积的0.1 mmol/L的柠檬酸缓冲液。对于血糖过高或体重下降过快的大鼠每周接受4~5次,每次1~2u中效人胰岛素(优泌林N)皮下注射,以防止酮症或体重下降过快[2]。干预组大鼠每天以100 mg/kg的剂量腹腔注射还原型谷胱苷肽(商品名:阿拓莫兰,重庆药友制药公司)。实验结束时,去除中间死亡鼠和血糖恢复鼠进行实验统计。
1.2 一般组织学处理 观察期满后分批用水合氯醛过量麻醉处死大鼠,轻摘眼球,将右眼球固定于10%中性福尔马林中48 h,经乙醇常规脱水,二甲苯透明后浸蜡包埋。连续4 μm厚切片,用于HE染色;取左眼球迅速剥离视网膜放置于液氮中保存。
1.3 诱导型一氧化氮合酶的表达 免疫组织化学测定诱导型一氧化氮合酶表达:取石蜡切片,常规脱蜡、水化,抗原修复,3%H2O2孵育,血清封闭,PBS冲洗,滴加1:100稀释的iNOS抗体,4℃放置过夜,PBS冲洗,滴加生物素化二抗,37℃孵育10 min,PBS冲洗;滴加辣根过氧化物酶标记的链卵白素,37℃孵育15 min;DAB显色,苏木素复染,中性树脂封片。应用HPIAS•1000型高清晰度彩色病理图像分析系统,进行免疫组化图像分析:经标准灰度校正后,每张切片随机取5个视野,测定阳性染色物质的平均吸光度值,以每组的平均吸光度值进行比较。, 百拇医药(狄红杰 王小超 刘克冕)
【关键词】
还原型谷胱甘肽;视网膜;糖尿病;诱导型一氧化氮合酶
Activation of iNOS in the Retina of Diabetic Rat is Regulated by Glutathione
DI Hongjie,WANG Xiaochao,LIU Kemian.Department of Endocrinology,Jiangsu Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Nanjing 210028,China
【Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression of retina inducible isoform of nitric oxide synthase(iNOS)at different stage of Diabetic Rats and the effects of glutathione(GSH)on diabetic retinopathy. Methodsand Methods:Seventy SpragueDawley rats were randomly divided into control group、diabetic group and glutathione treatment group.Diabetic model of rat was induced by injecting streptozotocin(STZ).The morphology in retinal paraffin slide was observed by microscope.The expression of iNOS was detected by immunohistochemistry. ResultsHistopathology was detected at 3 months.The change of histopathology is severe at 6 months than at 3 months.1 months of diabetes in rats resulted in retinal iNOS activation(as detected by immunohistochemistry),and iNOS remained activated at 3 and 6 months of diabetes.Glutathione inhibited elevations of iNOS expression,without ameliorating the severity of hyperglycemia. ConclusioniNOS is activated in retina in diabetes before histopathology can be seen,and remains activated for the duration when the retinopathy is developing.Glutathione might be inhibiting the development of retinopathy by inhibiting iNOS activation.
【Key words】
Glutathione;Retina;Diabetes;Inducible isoform of nitric oxide synthase(iNOS)
作者单位:210028 江苏省中西医结合医院内分泌科
糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见和最严重的并发症之一,其已成为大多数发达国家工作年龄人群致盲的首要原因[1]。
一氧化氮(NO)能调节许多重要的生理过程,包括神经传递、血管舒张等,是视网膜血管功能的重要调节因子,在糖尿病视网膜病变患者及动物模型中都发现一氧化氮水平升高。一氧化氮合酶催还L精氨酸生成一氧化氮,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生过多的一氧化氮已经被证明在包括糖尿病视网膜病变在内的许多眼科疾病中发挥重要作用。
本实验旨在探讨糖尿病视网膜病变与iNOS的表达的关系并探讨还原型谷胱甘肽对iNOS表达的影响以及对糖尿病视网膜病变的防治作用。
1 材料和方法
1.1 糖尿病动物模型的建立及分组 实验动物为生后6周、体重180~200 g的雄性SD大鼠70只,本院实验动物部提供。大鼠随机分成对照组10只,糖尿病组36只(1、3、6月各12只),干预组24只(3、6月各12只)。糖尿病组、干预组鼠按60 mg/kg的剂量一次性腹腔内注射链脲佐菌素(STZ,美国Sigma公司),3 d后使用血糖仪(强生公司稳豪型)测空腹血糖达16.6 mmol/L以上,且尿量及饮水明显增多鼠为糖尿病大鼠模型。对照组仅腹腔内注射同样体积的0.1 mmol/L的柠檬酸缓冲液。对于血糖过高或体重下降过快的大鼠每周接受4~5次,每次1~2u中效人胰岛素(优泌林N)皮下注射,以防止酮症或体重下降过快[2]。干预组大鼠每天以100 mg/kg的剂量腹腔注射还原型谷胱苷肽(商品名:阿拓莫兰,重庆药友制药公司)。实验结束时,去除中间死亡鼠和血糖恢复鼠进行实验统计。
1.2 一般组织学处理 观察期满后分批用水合氯醛过量麻醉处死大鼠,轻摘眼球,将右眼球固定于10%中性福尔马林中48 h,经乙醇常规脱水,二甲苯透明后浸蜡包埋。连续4 μm厚切片,用于HE染色;取左眼球迅速剥离视网膜放置于液氮中保存。
1.3 诱导型一氧化氮合酶的表达 免疫组织化学测定诱导型一氧化氮合酶表达:取石蜡切片,常规脱蜡、水化,抗原修复,3%H2O2孵育,血清封闭,PBS冲洗,滴加1:100稀释的iNOS抗体,4℃放置过夜,PBS冲洗,滴加生物素化二抗,37℃孵育10 min,PBS冲洗;滴加辣根过氧化物酶标记的链卵白素,37℃孵育15 min;DAB显色,苏木素复染,中性树脂封片。应用HPIAS•1000型高清晰度彩色病理图像分析系统,进行免疫组化图像分析:经标准灰度校正后,每张切片随机取5个视野,测定阳性染色物质的平均吸光度值,以每组的平均吸光度值进行比较。, 百拇医药(狄红杰 王小超 刘克冕)