儿童支气管哮喘血清IL4\IL10和IFN-γ浓度的测定及其临床意义(1)
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参见附件(1851KB，3页)。
依据所分泌细胞因子的不同辅助性T细胞(Helper T cells,Th)可分为两个亚型,即Th1细胞和Th2细胞,Th1细胞主要分泌以IFNγ为代表的细胞因子,Th2 细胞主要分泌 IL 4、IL10 为代表的细胞因子[1]。细胞因子在针对抗原刺激,调节淋巴细胞应答中起到关键作用,Th1/Th2细胞的失衡参与多种免疫性疾病的发生和发展[2]。为了探讨IL4、IL10和IFNγ在支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)发病机制中的作用,本研究以健康儿童为对照,观察了哮喘儿童血清IL
基金项目:济南市卫生科技发展计划项目(项目编号:200627)
作者单位:250022山东大学齐鲁儿童医院呼吸科
4、IL10和IFNγ水平的变化,以期探讨儿童哮喘的发病机制,并为临床诊疗新方法的开展提供依据。
1 对象和方法
11 研究对象
随机收集于2008年6月1日至2009年1月31日期间,在山东大学齐鲁儿童医院门诊就诊的哮喘患儿作为哮喘组,患儿皆处于发作期且未用药治疗。哮喘诊断标准全部符合2003年中华医学会儿科分会呼吸学组修订的支气管哮喘诊断标准[3]。共计47例,其中男28例,女19例。
另外,随机选取性别和年龄与哮喘组相匹配的健康查体儿童作为正常对照者组。共计51例,其中男30例,女21例。
以上受试对象或其家属均对本研究签署知情同意书。
12 研究方法
121 血液标本的收集和处理 使用一次性空白采血管采集受试者清晨空腹静脉血2 ml,放置4℃冰箱30~60 min,待血液凝集后3000rpm离心15 min,小心吸取上液,得到血清,80℃保存待检。
122 血清IL4,IL10及IFNγ浓度的测定 血清IL4,IL10及IFNγ浓度的测定采用双抗体夹心ELISA法检测,ELISA试剂盒购自上海西塘生物科技公司,操作严格按照说明书的操作步骤进行。各细胞因子检测的板内、板间变异系数均<10%。
13 统计学分析
用SPSS 110 for Windows 软件进行数据分析。计量资料以平均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验,方差不齐时采用MannWhitney 秩检验。计数资料采用χ2检验。双侧检验,P<005表示具有显著意义,P<001表示具有非常显著意义。
2 结果
21 研究对象的一般资料
受试对象皆完成研究,资料均有效,皆纳入结果分析。哮喘组患儿共47例,其中男28例,女19例;平均年龄(249±128)岁。正常对照组儿童共51例,其中男30例,女21例;平均年龄(236±117)岁。二组之间的性别构成、年龄等差异无显著统计学意义(P>005),具体见表1。
22 哮喘组与正常对照组血清IL4,IL10和IFNγ浓度及其比较
分别以IL4、IL10和IFNγ系列浓度标准品与相应吸光度(OD)制作IL4、IL10和IFNγ标准曲线,并建立回归方程。IL4标准曲线标准品浓度与相应吸光度(OD)的相关性0998,回归方程为:Y=101451+1242619X。IL10标准曲线标准品浓度与相应吸光度(OD)的相关性0992,回归方程为:Y=157564+952507X。IFNγ标准曲线标准品浓度与相应吸光度(OD)的相关性0994,回归方程为:Y=131688+1062686X。以上回归方程中Y代表样品浓度,X代表样品OD值。根据每个样品各细胞因子的OD值,推算相应的浓度大小,结果见表2。
表2显示哮喘组血清IL4浓度(34674±8292)pg/ml显著高于正常对照组(19987±5925)pg/ml(P<001);而哮喘组血清IL10浓度(8638±5858)pg/ml与正常对照组(9877±3705)pg/ml的差异无统计学意义(P>005);哮喘组血清IFNγ浓度(9451±2292)pg/ml低于正常对照组(11075±4711)pg/ml(P<005)。
3 讨论
哮喘是儿童期最常见的慢性呼吸道疾病,以气道阻塞、气道炎症和气道高反应性为特征。近年来,哮喘的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势。全球约3亿哮喘患者,各国患病率1%~13%不等,2000年我国调查显示,中国城区儿童哮喘患病率为197%,哮喘已经成为全球范围内严重的公共卫生问题之一。关于哮喘的病因有许多学说,如1966年石坂等提出IgE学说,1968年Szentivanye提出β肾上腺阻断学说,1983年Holtzman等提出呼吸道炎症学说,近年来有学者又提出了Th1/Th2类细胞因子失衡学说。然而,令人遗憾的是哮喘的发病机制至今还未完全明确[4]。
Th1和Th2细胞在机体免疫和疾病发生转归过程中所起的作用几乎截然不同。Th1细胞免疫主要介导细胞毒和局部炎症有关的免疫应答,可能与器官特异性自身免疫病、接触性皮炎、不明原因的慢性炎症性疾病、迟发性超敏反应及移植排斥反应有关,主要分泌以IFNγ为代表的细胞因子。Th2细胞的主要免疫效应是刺激B细胞增殖并产生免疫球蛋白,尤其是IgE抗体,与体液免疫相关,对于抗胞外菌感染意义重大,Th2 细胞主要分泌 IL 4、IL10 为代表的细胞因子,过度的Th2免疫应答,则可能削弱机体对感染因子的保护防御机制,并且可能在遗传易感的个体引发过敏性特异症,哮喘就与过度的Th2免疫有密切关系[56]。
IL4的主要作用是增强B细胞对T细胞的相互作用,促进体液免疫应答,特别是促进IgE介导的免疫应答反应,是IgE的特异性诱导剂,可使静止B细胞活化,产生特异性IgE。IL4还能促进血管内皮细胞黏附分子的表达从而导致嗜酸粒细胞在炎症部位的选择性聚集,导致气道炎症[7]。本研究结果显示,儿童哮喘血清IL4水平显著高于正常对照组(P<001),这说明IL4与哮喘气道重构的发生存在内在关联性,IL4水平的升高可能是气道重构发生的病理机制之一 ......
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