介绍一种简洁实用的网状纤维染色方法
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【摘要】 石蜡切片病理诊断除需常规HE染色片外,在某些情况下还需要免疫组织化学染色及特殊染色辅助诊断,网状纤维染色就是特殊染色中的一项,也是其中较难掌握的一项,现就我们科在多年实际工作中的经验,对该项染色方法的体会做个总结。
【关键词】
病理学技术;石蜡切片;网状纤维染色
在病理技术工作中,石蜡切片除进行常规HE染色外,有时还需进行其他特殊的染色,如网状纤维染色。网状纤维染色在特殊染色中算是比较难掌握的一种,其染色结果的好坏不仅取决于切片的脱蜡效果[1],还与染色的时间及温度密切相关。我科经多年实际操作,用迈新公司的网状纤维染色试剂盒对网染的时间和温度的控制进行了多次摸索比较,现就工作体会介绍如下。
1 材料与方法
11 材料 网状纤维染色试剂盒(福州迈新生物技术开发有限公司)、石蜡切片、湿盒
12 方法(我科室摸索条件) ①石蜡切片脱蜡处理到水,冲洗干净后置于湿盒内;②滴加一滴(100 μl)氧化液(试剂A)于切片上孵育3~5 min,流水冲洗1 min;③滴加一滴(100 μl)漂白液(试剂B)漂白至切片无色,流水冲洗;④滴加一滴(100 μl)媒染液(试剂C)孵育5~10 min,流水冲洗再蒸馏水洗(1次);⑤将氨银液(试剂D)和蒸馏水(1∶3)混合均匀后,滴加一滴(100 μl)在切片上,并放于37℃温箱中孵育2~3 h,后用蒸馏水速洗一次;⑥滴加一滴(100 μl)还原液(试剂E)孵育10~30 s至组织变成棕黑色,流水冲洗;⑦苏木素复染[2],脱水,透明,中性树胶封固。
2 结果
网状纤维呈黑色,胶原纤维呈黄棕色,细胞核呈蓝色。
3 讨论
在病理诊断中,除常规HE片外,有时还需要对切片进行其他特殊的染色,网状纤维染色就是其中的一项。以慢性萎缩性胃炎诊断为例,在HE染色中胃黏膜有无萎缩较难判断,网状纤维染色可较清楚显示胃黏膜正常结构破坏,间质纤维增生,有助于胃黏膜萎缩的诊断。网状纤维染色的应用非常广泛,常用于区别上皮性还是非上皮性来源的恶性肿瘤、血管内皮细胞瘤或外皮细胞瘤、恶性淋巴瘤或组织细胞肉瘤、骨异质增生或骨化性纤维瘤、粘液纤维瘤与粘液肉瘤、鉴别脑膜瘤与星形细胞瘤,还可用于判断肝组织的网状支架塌陷破坏或增生的情况[3]。网状纤维染色在特殊染色中算是比较难掌握的一种,以肝脏穿刺组织石蜡切片网染为例,用常规Gomori银染色法[4]进行染色:石蜡切片常规脱蜡至水→高锰酸钾氧化液5 min,再用自来水洗1 min→2%草酸漂白2 min,水洗2 min→2%硫酸铁铵媒染2 min→水洗1 min,蒸馏水洗2次→入氨性银溶液内1 min→蒸馏水洗2次后,用20%甲醛液还原5 min→蒸馏水浸洗2次→02%氯化金液1 min,蒸馏水洗2次→用丽春红S苦味酸染色液复染3~5 min→直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。染色结果是肝细胞间的网状纤维呈黑棕色,细胞核为蓝黑色。该染色方法所用时间较短,在操作上减轻了技术人员的工作量,但其在染色液上要求严格,如氧化液存放时间不能过长,以免失去氧化作用;配制氨性银溶液必须将器皿洗干净[5],滴加氨水时不能过量,以清亮为止;丽春红复染液一般须滴染方便,无水乙醇冲洗时要将切片倾斜,防止染液停留在切片上,以免使组织中的胶原纤维分布不均现象。而我们科改用迈新公司网染试剂盒对组织进行网染时,按照其染色步骤[6]要求进行染色,有时会受到环境温度的影响,短时间内切片无法上色或上色不均匀(镜下见细胞浆、细胞膜及细胞间质内呈淡黄棕色)导致误诊;经过对网染时间及温度进行多次摸索比较后,使切片滴加氨银液后在37℃恒温箱内孵育2~3 h,因其孵育时间长且恒温,组织上色好,颜色对比明显(镜下见细胞膜间的网状纤维呈黑色,细胞核呈蓝色),提高了网染质量及阅片效果。此染色法在染色中对冲洗步骤要求较严,尤其是在滴加氨银液孵育后,冲洗不到位时组织切片在镜下可见有较多黑色银沉渣残留,影响阅片效果。
参 考 文 献
[1] 郑燕璇,王晓鸿,苟新敏.石蜡切片脱蜡方式的比较.中国实用医药,2009:211 ......
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