HPLC测定糖尿乐胶囊中人参皂苷Rg1的含量
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【摘要】 目的 建立HPLC测定糖尿乐胶囊中人参皂苷Rg1含量的方法。方法 选用Diamonsil(钻石)柱(46×250 mm,5μm);乙腈005%磷酸(19:81)为流动相;检测波长为203 nm;流速10 ml/min。结果 人参皂苷Rg1在09952~49760 ug范围内,呈良好的线性关系。结论 本法简便、准确,适用于糖尿乐胶囊中人参皂苷Rg1的含量测定。
【关键词】
高效液相色谱法;糖尿乐胶囊;人参皂苷
HPLC Determination tangniaole capsules in Rg1 Content
LI Yinglian, JIA Guilong, Che Xuan.
Pharmacy department of Dongfeng county hospital,Jilin 136300,China
【Abstract】 Objective to establish HPLC determination tangniaole capsules in Rg1 content Methods Diamonsil ( diamond ) column (46 × 250 mm, 5 μ m); acetonitrile 005% phosphoric acid (19: 81) as mobile phase; detection wavelength for 203nm; velocity 10 ml/min Results ginsenoside Rg 1 in 09952~49760 μg range,had good linear relationshipConclusion this method is simple, accurate, suitable for tangniaole capsules in Rg1 determination
【Key words】
HPLC, tangniaole capsule, ginsenoside
本品处方中,人参为传统名贵中药,经现代医学和药理研究证明,人参皂苷为人参的主要有效成分之一,它具有人参根的主要生理活性。且采用HPLC方法测定人参皂苷含量方法比较成熟,故本品采用灵敏度高,重复性好的高效液相色谱法,以人参皂苷Rg1为指标,测定其含量。
1 方法
11 仪器与试药 高效液相色谱仪(岛津LC20A、在线脱气、SPD20A检测器Diamonsil(钻石)柱(46×250 mm,5 μm),乙腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯,人参皂苷Rg1对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:110736200424)
12 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1 ml含025 mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备[1]取本品内容物5 g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷适量,回流提取至无色,弃去三氯甲烷液,取出滤纸包,吹干,加甲醇适量,回流提取至无色,提取液蒸干,残渣加正丁醇饱和的水30 ml使溶解,转移至分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取5次(30 ml、20 ml、20 ml、20 ml、15 ml),合并正丁醇液,加正丁醇饱和的氨试液60 ml洗涤一次,弃去氨液,分取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液10 μl与供试品溶液20 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
13 方法学考察
131 色谱条件的选择[3]
检测波长 采用DAD检测器对人参皂苷Rg1进行全波长扫描,结果人参皂苷Rg1在流动相条件下最大吸收波长为203nm,故确定样品检测波长为203 nm。
流动相的考查 乙腈005%磷酸(19∶81),试验结果表明,使用此种组合流动相人参皂苷Rg1与其他色谱峰分离较好,且能达到基线分离,故选择乙腈005%磷酸(19:81)为流动相[2]。
色谱柱的考查 在上述流动相条件下,确定色谱柱为DiamonilC18色谱柱(5μm 46×250 nm,迪马公司,结果表明采用此色谱柱人参皂苷Rg1与其他色谱峰分离较好,且能达到基线分离。
132 阴性对照试验
称取处方中除人参以外的其他各味药材,制备阴性对照品,并按上述【供式品溶液的制备】项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液,进行测定。结果见图(图略)。
试验结果表明,阴性对照溶液与供试品溶液比较,在相应的位置上未出峰,说明阴性对照无干扰。
133 提取方法的选择
取重量差异项下的本品85粒,除去囊壳,取粉末约5 g,精密称定,(2份)分别加入三氯甲烷30 ml,采用索氏提取和超声提取,各1 h,提取液过滤,蒸干,残渣加正丁醇饱和的水30 ml使溶解,按上述供试品制备方法制成供试品溶液,测定,结果见表1。
134 线性关系的考查
取人参皂苷Rg1适量,精密称定,加甲醇配制成每1 ml含02488 mg的溶液,即得。分别精密吸取4 μl、8 μl、12μl、16 μl、20 μl注入液相色谱仪,测定,记录峰面积。以峰面积为横坐标,人参皂苷Rg1含量(μg)为纵坐标,绘制标准曲线,计算线性方程为:Y=(626E006)X+(336E001)(R=09997)。
结果表明 ,人参皂苷Rg1在09952~49760 ug范围内,呈良好的线性关系。
135 精密度试验
取线性关系考查项下的对照品溶液,精密吸取10 μl,连续进样6次,记录峰面积,峰面积RSD=14%。
结果表明,该方法精密度良好。
136 稳定性试验
取同一供试品溶液分别于配制后0、4、8、12、16、20 h依法测定峰面积,峰面积RSD=092% ......
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