紫杉醇改变FADD在食管鳞癌中的表达(1)
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【摘要】 目的 研究紫杉醇对人食管鳞癌细胞株Eca109中Fas相关死亡结构域蛋白(Fas associated death domain protein, FADD)表达的影响,探讨紫杉醇在食管鳞癌治疗中的作用机制。方法 流式细胞术检测不同浓度紫杉醇处理下，人食管癌细胞株Eca109细胞凋亡率，同时采用Western blotting分析细胞中FADD的表达变化。结果 紫杉醇诱导人食管癌细胞株Eca109细胞凋亡呈剂量依赖性;随着紫杉醇剂量的增加，实验组Eca109细胞中FADD表达呈显著增高。结论 一定剂量的紫杉醇可以提高FADD在食管癌细胞中的表达、促进食管癌细胞的凋亡，这可能是紫杉醇治疗食管癌的分子机制之一。
【关键词】 紫杉醇;食管癌;凋亡;FADD
Expression Of FADD induced by Paclitaxel In Esophageal Squamous Cell Carcinoma
WANG Hongmei，YANG Yubai.
The Cangxi Pepole’s Hospital,Sichuan Guangyuan 628400,China
【Abstract】 Objective To observe the changes of FADD expression in esophageal carcinoma cell 109(Eca109)induce by Paclitaxel.Methods With different concentration of paclitaxel, the apoptosis rates of Eca109 cells and protein expression levels of FADD in Eca109 cells were detected. Results The apoptosis rates of Eca109 cells were increased with concentration of paclitaxel rising,and protein expression levels of FADD in Eca109 cells were increase simultaneously. Conclusion Paclitaxel induced Eca109 cell apoptosis via changing protein expression levels of FADD.
【Key words】 Paclitaxel;Esophageal carcinoma; Apoptosis;FADD
食管癌是常见消化道恶性肿瘤之一，其发病隐匿,确诊时大多已属于中晚期，使很多患者在手术前后需要接受化学治疗,以确保手术效果，同时化疗也为很多失去手术机会的患者提供了治疗的机会。紫杉醇品名为Taxol，最早是Wall和Wani于1963 年从太平洋红豆杉的皮中提取得到[1]，经过临床试验后近年来已经广泛应用于临床包括食管癌在内的多种肿
瘤的化疗中。紫杉醇可作用于细胞凋亡受体途径的Fas/FasL 通路或激活凋亡启动途径的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶系统(caspases), 诱导细胞凋亡[2,3]，而FADD是Fas/FasL凋亡系统中的必需分子，不仅参与细胞凋亡过程的发生，还与细胞周期的调节有关。研究[4]证实从食管正常黏膜到不典型增生的组织中，FADD蛋白及mRNA表达呈现显著下降趋势。已有临床研究[5,6]表明紫杉醇联合顺铂、奈达铂、氟尿嘧啶等药物治疗食管癌,可以提高其总有效率,且毒副作用无明显增加，患者耐受性较好，表明紫杉醇在食管癌治疗中具有很高的临床应用价值。同时紫杉醇对人食管癌细胞的生长有明显的抑制作用, 使细胞分裂阻滞于G2-M 期, 并诱导肿瘤细胞凋亡[7]。但现有研究并没有对这一过程中食管癌细胞中FADD的表达变化情况作进一步研究。
作者通过检测不同浓度紫杉醇诱导人食管鳞癌细胞株Ec-109 细胞凋亡,并检测细胞表达FADD蛋白的变化情况，探讨紫杉醇抑制人食管癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的分子机制,为临床应用提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 试剂与药物 泰素(紫杉醇的商品名, 由百时美施贵宝公司惠供, 6 g/L, 分子质量8539 u)，RPMI1640培养液、005%的胰蛋白酶及小牛血清为Hyclone产品, Annexin V(FITC)/PI凋亡检测试剂盒购于杭州隆基生物工程研究所, 蛋白提取液购于Pierce公司，兔抗人FADD单克隆抗体及鼠抗人β-actin单克隆抗体购于Santa Cruz公司，考马斯亮蓝试剂盒购于南京建成生物科技有限公司。
1.2 细胞与细胞培养 人食管癌细胞株Eca-109(ATCC)由上海麦莎生物科技有限公司代购。细胞接种于含10% 小牛血清的RPMI 1640培养液培养, 生长于37℃含5% 的CO2孵箱中, 待细胞生长至对数生长期开始实验。胰蛋白酶消化细胞后培养基重悬，调整细胞数为5×10.5/ml接种于6孔培养板进行培养， 24 h后更换新鲜培养液，同时实验组培养液中分别加入终浓度为 5、10、20、50 nmol/L 泰素，对照组不加药物，每个浓度设3个复孔，培养24 h后收集各组细胞。
1.3 凋亡检测 ......
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