板车消炎颗粒微生物限度检查法的验证
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【摘要】 目的 建立板车消炎颗粒的微生物限度检查法。方法 按《中国药典》2010年版的要求对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证。结果 板车消炎颗粒可按常规法进行微生物限度检查。结论 药品的微生物限度检查法应进行验证，以保证结果的准确性。
【关键词】
微生物限度检查法；验证试验
板车消炎颗粒由板蓝根、车前草等中药制成，具有清热解毒功效，用于病毒性感冒、扁桃腺炎、流行性腮腺炎等。《中国药典》2010年版规定，建立药品的微生物限度检查法，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和控制菌检查方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查。本文按《中国药典》2010年版的要求就板车消炎颗粒的微生物限度检查法进行验证试验。
1 仪器与试药
SW-CJ-1F净化工作台(苏州净化设备厂)；电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)；大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]，金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]，枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]，白色念珠菌[CMCC(F)98 001]，黑曲霉[CMCC(F)98 003](中国药品生物制品检定所)；营养肉汤培养基，改良马丁培养基，改良马丁琼脂培养基，胆盐乳糖培养基，4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基，营养琼脂培养基，玫瑰红钠琼脂培养基(北京三药科技开发公司)；蛋白胨(广东光华化学厂有限公司)；氯化钠(广东台山市新宁制药厂)；磷酸氢二钠(广州化学试剂厂)；磷酸二氢钾(广东台山粤侨试剂塑料有限公司)；聚山梨酯80(北京市海淀会友精细化工厂)；板车消炎颗粒(本院制剂室，批号：20101018，规格：每袋10 g)。
对细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基和控制菌检查用的培养基进行了适用性检查，均符合规定。
2 方法与结果
2.1 供试液制备 取本品10 g，加pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，振摇，制成1：10供试液。
2.2 菌液制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30℃~35℃培养24 h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1 ml含菌数为50~100 cfu的菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，20℃~25℃培养48 h，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1 ml含菌数为50~100 cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养7 d，加入5 ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释成每1 ml含孢子数为50~100 cfu的孢子悬液。
2.3 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证
2.3.1 试验组 取供试液1 ml,加入到1个平皿中,平行制备10个平皿,分别加入已制备好的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液1 ml(含50~100 cfu),每种菌平行制备2个平皿,含金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的平皿倾注营养琼脂培养基,置30℃~35℃培养3 d,计数；含白色念珠菌、黑曲霉的平皿倾注玫瑰红钠琼脂培养基，置23℃~28℃培养5 d，计数。
2.3.2 菌液组 分别取已制备好的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液1 ml(含50~100 cfu),加入到1个平皿中,各制备2个平皿。培养基、培养时间、温度、计数同2.3.1。
2.3.3 供试品对照组 取供试液1 ml,加入到平皿中,平行制备4个平皿。2个平皿倾注营养琼脂培养基，另2个平皿倾注玫瑰红钠琼脂培养基。培养时间、温度、计数同2.3.1。
2.3.4 稀释剂对照组 取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1 ml，加入到1个平皿中,平行制备10个平皿,分别加入已制备好金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的菌悬液1 ml(含50~100 cfu),每种菌平行制备2个平皿。培养基、培养时间、温度、计数同2.3.1。
各试验菌分别进行3次独立的平行试验，计算每次试验的回收率。稀释剂对照组的菌回收率(稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分数)和试验组的菌回收率(试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分数)均应不低于70%。结果见表1。
2.4 控制菌检查方法的验证 取供试液10 ml及1 ml已制备好的大肠埃希菌菌液(含50~100 cfu)加入100 ml胆盐乳糖培养基中，置于30℃~35℃培养18~24 h,按大肠埃希菌微生物限度检查法进行检查[1]。共进行3次独立的平行试验，结果见表2。
3 讨论 ......
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