反相高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参素的含量
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【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参素含量的方法。方法 HPLC法，Hypersil填料C18柱，流动相为甲醇 0.05%磷酸溶液(5∶95)，流速为1.0 ml/min，检测波长为280nm。结果 丹参素0.088～2 μg范围内线性关系良好(r=0.9995)，平均回收率为99.2%，RSD为1.7%。结论 该方法简便、灵敏、准确，可作为复方丹参片的质量控制标准。
【关键词】高效液相色谱法；复方丹参片；丹参素
Determination Content of Danshensu sodium in Danshenpian Mixture by HPLC.
ZHANG Si jun;Departmeng of Pharmacy, Huaihua Third people’s Hospital Affiliated Huaihua Junior College of Medicine,Huaihua 418000 China
【Abstract】 Objective To establish an HPLC method for the determination of DanShensu sodium. Methods HPLC and a Hypersil C18 Column was used. The mobile phase was methanol 0.05% acetic acid(5:95). The detective wavelength was at 280 nm, the flow rate was 1.0 ml/min. Results The linear range of danshensu sodiun was 0.088~2 μg，(r=0.9995).The average recovery was 99.2%，RSD 1.7%. Conclusion The method is simple and rapid which can be used for the quality control of Danshenpian mixture.
【Key words】HPLC；Danshenpian mixture；Danshensu sodium
复方丹参片临床上常用的一种复方制剂，由丹参、葛根等中药经过提取精制而成，具有活血化瘀、通脉养心、活血消肿、养血安神等功效，临床用于治疗冠心病、心绞痛、胸中憋闷等疾病[1]。丹参素钠为其中主要水溶性成分，丹参素钠的含量测定方法主要有紫外分光光度法[2]、薄层扫描法[3]及HPLC法[4]等。笔者采用反相高效液相色谱法测定本品中的丹参素钠的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪，UV 2550紫外分光光度计，AG204电子天平，Empower Ⅱ色谱工作站。
1.2 试药 复方丹参片的阴性对照品为医院自制；丹参素钠对照品供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所(批号:110805 200508)；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 美国热电色谱柱(Hypersil填料，4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温40℃；进样量10 μl，流动相为甲醇 0.05% 磷酸溶液(5:95)，流速1.0 ml/min，检测波长280 nm；理论板数按丹参素钠计算应不低于3000。图1。
A.丹参素钠对照品 B.复方丹参片供试品 C.丹参素阴性对照品
图1
复方丹参片中丹参素钠含量测定HPLC色谱图
2.2 对照品溶液的制备 精密称取丹参素钠对照品1.76 mg，置10 ml量瓶中；加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中；加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含17.60 μg的溶液即得。
2.3 供试品溶液的制备 取本品20片，除去薄膜衣，精密称定，研细(过三号筛)，精密称取适量(约相当于15片的重量)，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml，称定重量，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 ml，置10 ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备 取丹参素的阴性样品，按“2.3”项下方法制成阴性对照品溶液。
2.5 系统适应性试验 分别精密吸取“2.2”、“2.3”、“2.4”项下溶液各10 μL,按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见图1。
2.6 线性关系考察 精密吸取“2.2”项下丹参素钠对照品溶液5,10,20, 30, 40 uL, 分别注入液相色谱仪；按上述条件分别测定丹参素钠的吸收峰峰面积，以进样量为横坐标(X )，以峰面积积分值为纵坐标(Y )，进行回归处理。结果 丹参素钠在0.088~0.704 ug范围内，进样量与峰面积积分值之间线性关系良好，回归方程为Y=2.069973×106X + 1.888410×104，r=0.9995。
2.7 精密度试验 精密吸取“2.2”项下对照品贮备液，按“2.1”项下色谱条件重复进样6次，20 μl/次，结果RSD=0.45%，表明本方法具有较高精密度。
2.8 稳定性试验 取同一批供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件每隔1 h取10 μL进样1次，共10次，结果RSD=0.65%，表明样品在10 h内稳定性良好。
2.9 重复性试验 取同一批复方丹参片样品5份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果该批样品丹参素的平均含量为1.20%(RSD=0.69%)，表明本方法重复性较好。
2.10 回收率试验 取已知含量的样品研细，称约1 g，精密称定，精密加入丹参素钠对照品的甲醇溶液(0.01712 g/L)25 ml, 以下按“2.3”项下供试品溶液制备方法操作，制成加样供试品溶液。吸取加样供试液10 μl，注入液相色谱仪，按上述方法测定加样供试液中丹参素钠含量，计算回收率。结果丹参素钠平均回收率为99.2%，RSD为1.7%。
2.11 样品含量测定 取3批样品，按上述“2.3”方法操作，各制备3份供试品溶液，依法测定，结果见表1。
表1
样品中丹参素钠含量测定结果(mg/g) ......
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