IL1β对人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5ACmRNA的表达的

IL1β对人鼻黏膜上皮细胞黏蛋白MUC5ACmRNA的表达的影响(2)

http://www.100md.com 2011年5月5日《中国实用医药》 2011年第13期

     132 RNA样品鉴定利用紫外分光光度计(日本SHIMADZU UV mini 1240)上测定RNA样品在波长为260 nm时的吸光度值(A值)。总RNA质量浓度计算公式：质量浓度(g/L)=A260 稀释倍数(120倍) 40/1000。

    133 逆转录反应取4 μl RNA模板做逆转录反应，仪器为PE9600PCR仪(美国Perkin Elmer公司)。反应体系如下： 5 逆转录buffer 4 μl，上游引物(10pM/μl)04 μl，下游引物 (10pM/μl)04 μl，dNTPs(25 mM)02 μl，MMLV(10U/μl)1 μl，DEPC水 10 μl，RNA模板4 μl。总体积： 20 μl。逆转录buffer成分：50 mM TrisHCl(pH80), 50 mM KCl, 4 mM MgCl2, 10 mM DTT。反应条件：37℃ 1 h，然后95℃ 3 分钟。

    134 MUC5AC扩增引物及荧光探针(中山大学达安基因公司) 上游引物(外引物)5TGA CGG ACC TGG ATG TGG T3 ......

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