依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响
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【摘要】 目的 探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞的保护作用。 方法 采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO)，将动物随机分为假手术组、生理盐水组和依达拉奉组，采用比色法测定脑组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力，免疫组化法检测caspase-3的表达水平，原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平。 结果 依达拉奉治疗组与生理盐水组相比，脑组织中MDA含量显著降低(P<0.05)，SOD活力显著升高(P<0.05)；同时依达拉奉治疗组的脑神经元caspase-3的表达水平及细胞凋亡水平比生理盐水组显著减少(P<0.05)。结论 依达拉奉可有效提高大鼠局灶性脑缺血时脑组织中SOD活力，降低MDA水平，并且有效抑制caspase-3表达，对抗神经细胞凋亡。
【关键词】 依达拉奉; 脑缺血; 凋亡
【Abstract】 Objective To study the protective effects of Edaravone on rats after focal cerebral ischemia. Methods 36 male Wistar rats were randomly divided into three groups: the sham group, the NS control group and Edaravone intervention group. The model of global cerebral ischemia was induced by occlusion of the right middle cerebral artery. The Edaravone groups were given intraperitoneal injection of Edaravone(3 mg/kg). Using the colorimetry, we analyzed the quantity of maleic dialdehyde(MDA)and enzyme activity of super oxide dismutase(SOD)of the brain tissues in all groups. The expression of caspase-3 and the apoptosis in neural cells were confirmed respectively by immunohistochemistry(TUNEL). Results Compared with the NS group and the sham group，the quantity of MDA declined greatly(P<0.05), while the activity of SOD in cerebral neuron increased markedly in the Edaravone intervention group(P< 0.05). The number of apoptotic neuron in the Edaravone intervention group was fewer than the NS group. Conclusion Edaravone can inhibit apoptosis by upgrading the activity of SOD,downgrading the quantity of MDA probably and inhibit the express of caspase-3. It will be a good medicine in cerebral ischemia.
【Key words】 Edaravone； Cerebral Ischemia；Apoptosis
依达拉奉是一种自由基清除剂，其分子结构上具有亲脂基团,易到达脑组织, 血脑屏障的通透性高达60%，具有自由基清除和抑制脂质过氧化的作用，可以抑制脑细胞(血管内皮细胞和神经细胞)的过氧化损伤，减轻脑缺血引起的脑水肿和组织损害，是一种有效的脑神经保护剂。自问世以来, 已被广泛用于脑梗死的治疗，本实验采用线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型，以探讨依达拉奉对脑缺血时神经细胞凋亡的抑制作用及可能机制。
1 材料
1.1 动物与分组 成年雄性Wistar大鼠36只，体重280~320 g，随机分为假手术(Sham组)组、缺血+生理盐水对照组(NS组)和脑缺血+依达拉奉干预组(依达拉奉组)。每组12只大鼠，6只动物取脑组织用于MDA、SOD活力的检测，6只动物行脑组织病理切片用于免疫组化和TUNEL染色，检测凋亡水平。
1.2 试剂 依达拉奉注射液由先声药业股份有公司提供(30 mg/20 ml)； TUNEL试剂盒、caspase-3试剂盒购自北京中杉公司。
1.3 仪器 冰冻切片机 显微照相系统 超低温冰箱
2 方法
2.1 模型制作 参照Zea-longa法[1]，大鼠以10%水合氯醛腹腔麻醉，颈正中切口，在距颈总动脉(CCA)分叉处约5~8 mm处分别结扎颈外动脉(ECA)和颈总动脉(CCA) ......
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