莲房花青素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究
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【摘要】 目的 研究莲房花青素对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响，探讨其抗癌机制。方法 以不同浓度的莲房花青素(LSPC)与人肝癌细胞株SMMC-7721细胞共培养，MTT法测定细胞增殖。结果 LSPC可体外抑制肝癌细胞生长，抑制率呈浓度和时间依赖性并随浓度增加而增高。结论 莲房原花青素(LSPC)可能通过诱导细胞凋亡抑制人肝癌细胞增殖。
【关键词】 莲房原花青素；肝癌细胞；细胞凋亡
Effects of proanthocyanidions on apoptosis in SMMC-7721 human hepatocellular carcinoma
LIANG Hui-Min, SHI Xiao-Yan, SUI Yu-Min, et al.
College of Pharmacy, Henan University, KaiFeng 475004,China
【Abstract】 ObjectiveTo investigate the effects of procyanidins from the seedpod of the lotus(LSPC)on apoptosis of human hepatoma cell line SMMC-7721. Methods SMMC-7721 cells were exposed to different concentration of LSPC. The suppression rate of cell proliferation was measured by MTT. Results The cell growth was inhibited significantly by LSPC. Conclusion LSPC inhibits the growth of SMMC-7721 cells and induces apoptosis in a concentration-dependent manner. It is suggested that LSPC has the ability of antitumor by induction of apoptosis of SMMC-7721 cells.
【Key words】 Procyanidins from the seedpod of the lotus； Hepatocellar carcinoma；Apoptosis
原花青素是一种广泛存在于植物内的酚类聚合物，在葡萄皮和籽内含量最高，有很强的生物学活性及药理作用[1]。有报道，原花青素对乳腺癌、肺癌及白血病等肿瘤有显著的抑制作用[2]。而对莲房原花青素(procyanidins from the seedpod of the lotus，LSPC)的研究较少。目前发现LSPC有抗肿瘤作用，为进一步探讨LSPC抑制细胞增殖的机制，本研究探讨了LSPC是否能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡，以期为临床应用提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 材料、化学试剂和仪器
人肝癌细胞 SMMC-7721购自中国医学科学院基础医学研究所；胎牛血清购于Gibco公司；RPMI 1640购于Gibco公司；LSPC由本实验室自制，纯度>98%为棕褐色粉末；DMSO、MTT均购自Promega公司；其他试剂均为国产分析纯。
1.2 方法
1.2.1 MTT实验
选择对数生长期SMMC-7721细胞，将浓度为1×105/ml细胞接种于96孔板(200 μl/孔)。24 h后换含不同浓度(0.025,0.25,2.5,25,250 μg/ml)LSPC培养液200 μl，分别于24，48 h后弃上清，加5 mg/ml MTT液20 μl/孔，4 h后弃上清，加DMSO 150 μl/孔，振摇待蓝色晶体溶解，测定570 nm 吸光值(A 值)，空白孔调零。设阴性孔(加200 μl含细胞完全培养基)和空白孔(只加200 μl完全培养基)，每组浓度设3个平行孔，取均值。按下列公式计算抑制率：
细胞增殖抑制率/%=(对照组A值-处理组A值)/(对照组A值-空白组A值)×100 %。
1.2.2 统计学方法
数据采用均数±标准差(x±s)表示，用SPSS 12.0 软件，进行单因素方差分析及两两比较t检验。
2 结果
不同浓度LSPC对SMMC-7721 细胞增殖的影响
由图1可知，LSPC作用24 h，低浓度组(0.025 μg/ml)细胞增殖抑制率与对照组相比，差异无统计学意义；中高浓度(0.25~250 μg/ml)组显著高于对照组；LSPC作用48 h，试验组细胞抑制率均显著高于对照组。
图1
LSPC 对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制率的影响
注：*表示与空白组比较差异有统计学意义*P<0.05，**P<0.01
3 讨论
研究发现，一些中药复方或单味药有效成分有诱导肿瘤细胞凋亡作用[3]。原花青素是植物中多酚类化合物，也是一种氧自由基清除剂和脂质过氧化抑制剂[4,5]。莲房中含蛋白质、脂肪、糖、维生素B2及微量莲子碱等，有“化瘀止血”功效。
本文用MTT法观察LSPC对SMMC-7221细胞增殖的抑制作用，发现LSPC在0.25~250 μg/ml对SMMC-7221细胞凋亡有显著的抑制(P<0 ......
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