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吉林地区丙型肝炎病毒基因分型及临床意义的研究(1)

http://www.100md.com 2011年8月15日李晓峰马寅芙杨广民

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    参见附件(1987KB，2页)。

     【摘要】目的了解吉林地区HCV基因分型情况，为HCV感染者的诊断和治疗提供重要的科学依据。方法荧光定量RTPCR检测165例抗HCV阳性血清标本，并对153例HCVRNA阳性的血清标本应用基因芯片法进行HCV基因分型。结果 153例阳性标本中HCV1b型85例，HCV2a型63例，HCV1b/2a混合型5例。结论吉林地区HCV基因型主要为1b型，2a型次之，同时存在HCV1b/2a混合型。

    【关键词】

    丙型肝炎病毒;荧光定量RTPCR;基因分型

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    Genotyping and clinical significance of hepatitis C virus in Jilin

    LI Xiaofeng，MA Yinfu,YANG Guangmin. Peoples Hospital of Jilin Province，Changchun 130021，China

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    【Abstract】 Objective

    To investigate the distribution of hepatitis C virus (HCV) genotypes in Changchun and to provide information for the diagnosis and treatment of HCV.Methods Eightynine samples HCVRNA positive from 165 samples antiHCV positive sera by fluorescence quantitative RTPCR were further genotyped by gene chip.Results Fortynine sera was type 1b，63 sera was type 2a and 3 sera was 1b/2a mixedtype among 153 samples with HCVRNA positive.Conclusion HCVlb is the most dominant genotype，HCV2a is the second and HCV1b/2a mixedtype also exists in Changchun.

    【Key words】

    Hepatitis C virus;Fluorescence quantitative RTPCR;Genotype

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    作者单位：130021长春，吉林省人民医院

    丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)是丙型肝炎的病原体, 1989年由美国学者首次分离, 1991年国际病毒分类与命名委员会将HCV归类为黄病毒科丙型肝炎病毒属。HCV是小的有包膜的单股正链RNA病毒，属黄病毒科丙型肝炎病毒属，颗粒大致呈球形，直径约50 nm，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有突起，长约9400个核苷酸^1]。人感染丙肝病毒后比感染乙肝病毒更容易转化成慢性肝炎，并可能发展成肝硬化和肝癌。HCV基因型不仅影响着丙肝的临床发展过程，而且与抗病毒治疗和肝细胞癌的发生密切相关。因此，如何尽早、及时和准确地检测出HCV基因型显得非常重要。目前已报道HCV的主要基因型多达11个，基因亚型超过70种^2]。为了解吉林地区HCV基因型分布状况，对本地区165例抗HCV阳性血清标本进行了HCV基因型分析。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料试验组为吉林省人民医院门诊及住院患者165例抗HCV阳性血清标本，其中男98例，女67例，有输血史56例，年龄6～80岁。阴性对照组为20例健康体检者血清标本。

    1.2 试剂丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒：购于中山大学达安基因股份有限公司。丙型肝炎病毒基因分型检测芯片试剂盒：由中科院上海微系统与信息技术研究所研制，宁波瑞芯生物科技有限公司生产。自备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇。

    1.3 仪器美国PE7300荧光定量PCR，美国HBPχ222U型扩增仪，fresco型低温离心机，BENQ 5000 s扫描仪等。

    1.4 方法

    1.4.1 HCVRNA定量检测按照丙型肝炎病毒(HCV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒使用说明书进行操作，① RNA提取。②逆转录。③PCR扩增及荧光检测。④结果分析。抽取HCVRNA含量≥1.0×103拷贝/ml的阳性标本进行基因分型检测。

    1.4.2 HCV基因分型检测按照丙型肝炎病毒基因分型检测芯片说明书进行操作：①RNA提取与逆转录。②PCR扩增。③扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。④芯片杂交与显色。

    2 结果

    2.1 HCVRNA定量检测结果 97例抗HCV阳性标本中HCVRNA含量≥1.0×103拷贝/ml的标本为89例，HCVRNA含量<103拷贝/ml有8例，具体检测结果如表1。

    表1

    HCVRNA含量检测结果

    

    HCVRNA含量(拷贝/ml)<103103104105106107合计

    标本数122454263217165

    2.2 HCV基因分型检测结果对153例HCVRNA含量≥1.0×103拷贝/ml的标本和20例健康体检者进行基因分型检测。PCR扩增产物电泳阴性对照和阳性标本在芯片上进行杂交、显色，检测结果见表2。

    表2

    HCV基因分型结果(例，%)

    

    分型例数分型率

    1b8555.5

    2a6341 ......

http://www.100md.com/html/paper/1673-7555/2011/23/18.htm

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