不同CT值的脊柱结核病灶骨中OPG和OPGL的表达(1)
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【摘要】 目的 通过研究不同CT值的脊柱结核病灶骨中骨保护蛋白(OPG)和骨保护蛋白配体(OPGL)的表达情况以及与平均CT值的关系，揭示OPG和OPGL参与脊柱结核的病理过程，从分子水平深化对脊柱结核病灶骨硬化发生机制的认识。方法 用PV-6000二步法免疫组化检测技术测定OPG和OPGL的平均光密度及阳性面积比，并将其比值与平均CT值进行相关分析。结果 OPG和OPGL表达强度的比值与平均CT值呈正相关。结论 OPG和OPGL表达的动态不平衡导致了脊柱结核病灶周围硬化骨的产生。
【关键词】
脊柱结核；OPG；OPGL；免疫组化；CT
The expression of OPG and OPGL in the focus of different CT value of spinal tuberculosis
HE Yu-ze, WANG Zi-li， MA Teng. Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College, Xuzhou221002, China
【Abstract】 Objective
To explain the role of OPG and OPGL in the pathological process of spinal tuberculosis through studying the expression of OPG and OPGL in section of different CT value of spinal tubercular infectious focus. To analyze molecular mechanism of the indurascent focus of spinal tuberculosis. Methods Measured the mean optical density and percent of positive area of OPG and OPGL in the different group by means of PV-6000 two-step immunochemistry technique，while analyzed correlation between their expression and the mean CT value. Results Ratio of expression of OPG and OPGL and the mean CT value was direct correlation. Conclusion The dynamic unbalance of expression of OPG and OPGL led to the creation of ossified bone in spinal tuberculosis.
【Key words】
Spinal tuberculosis; OPG; OPGL; Immunohistochemistry; CT
作者单位：221002徐州医学院附属医院(何玉泽);宁夏医科大学附属医院(王自立 马腾)
对于脊柱结核病变周边椎骨硬化的认识，一方面，认为是机体自身免疫损伤修复的形态学改变，有利于局部病灶与周边正常椎体结构的隔绝，避免结核杆菌向远处扩散而导致进一步的结核性病理损害。另一方面，认为也是病变结构和抗痨药物的屏障，阻碍了抗结核药物的进入，为结核杆菌的残存提供了场所。脊柱结核椎骨硬化主要在CT影像显示最清晰，表现为高密度区域，这些区域在手术过程中显示为非常坚硬的骨质(硬化骨)，使传统的病灶刮除术不能把结核病灶彻底清除，这样术后复发率较高，但有关硬化骨产生机制的研究还鲜见报道。
1 资料与方法
1.1 一般材料
1.1.1 标本采集与分组 取脊柱结核患者术中切除的骨质,按照部位分为3组,紧挨病灶空洞壁的硬化骨质,切除少量正常骨质作为正常组,位于硬化骨和正常骨之间的部分组成亚正常骨组。
1.1.2 主要免疫组化试剂 PV-6000二步法免疫组织化学染色试剂盒购自河北博海生物工程开发有限公司,抗OPG和抗OPGL抗体均为兔抗人多克隆抗体,工作浓度均为1∶100。
1.2 方法
1.2.1 OPG和OPGL免疫组化染色(PV-6000二步法): 4%多聚甲醛磷酸缓冲液固定、10%EDTA脱钙液脱钙后的病灶骨组织标本进行常规石蜡包埋、切片，组织切片用二甲苯脱蜡，用梯度乙醇脱水，蒸馏水洗涤。采用高热高压抗原修复。每张切片加入3%H2O2去离子水，以阻断内源性过氧化物酶，防止标本中的内源性过氧化物酶使DAB发生显色发应，产生非特异性染色。每张切片分别滴加OPG或OPGL第一抗体(OPG、OPGL兔抗人多克隆抗体，工作浓度均为1∶100)，第一抗体会与组织中的OPG、OPGL发生特异性结合。每张切片分别滴加试剂A(post-blocking)和试剂B(Poly-HRP Antl Ms/Rb IgG)，第二抗体将与第一抗体发生特异性结合。滴加新鲜配制的DAB显色剂，此时过氧化物酶催化3,3-二氨基联苯胺与双氧水发生反应，产生棕黄色沉淀物 ......
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