人体外周血染色体G显带制备的影响因素(2)
1.4.4滴片滴片也是染色体制片好坏很关键的一步。载玻片的清洁度；滴片时操作不当致所滴悬液重叠；悬液浓度过浓或过稀；滴片时的高度等都直接影响染色体的分散。滴片时，先将新配制的固定液加入离心管，制成细胞悬液，加入量因制片多少及细胞的多少而定，以我们的经验以呈薄雾状为宜。滴片时需要有一定的高度，以使染色体分散良好。一般是用吸管吸取悬液后在30 ～40 cm左右处滴片，每张玻片上滴2～3滴，并用口轻轻吹散，马上放入80℃的烤箱中，以助染色体分散、固定在玻璃片上。滴片数为4张内。一张用于显带时预实验，二张用于发报告，另外一张备用，如需要便可用于C带，N带等实验，节约时间。
1.4.5G显带技术烤片时间应根据当前的空气湿度，灵活把握时间，湿度大烤片时间可延长；湿度小烤片时间可缩短，我们实验室一般烤片时间为80℃，3 h。准备立式染色缸3个：一缸为含0.025%胰酶的磷酸盐缓冲液(pH7.4)；另两缸为生理盐水。显带时，玻片放入37℃恒温箱中预温过的0.025%胰酶溶液中处理30 s左右(具体时间应做预实验)，并不断摇动玻片，使标本均匀接触液体。然后取出迅速投入生理盐水缸中漂洗，每次3s。漂洗后的玻片用配制好的Giemsa染液染色，时间为5 min(具体时间应做预实验)，用流水冲掉染液、晾干，必要时封片、镜检。镜检时，先在低倍镜下选择分散好、长度适中的分裂相，然后转换油镜观察其显带情况。这里需要提醒的是胰酶预温时要注意预温温度，温度过高可使胰酶变性失效，温度过低胰酶活性不强，胰酶最适温度为37℃；相同浓度，来源于猪、羊、牛的胰蛋白酶在G显带中的作用不尽相同，其中牛胰蛋白酶具有使染色体拉长的作用[4]；染色体在胰酶中的处理时间可因制片质量、片龄、烤片时间长短而不同；在不同个体的染色体制片中也可有差异；在进行预实验时，应片头，片中，片尾处尽可能多观察染色体的显带情况，以便摸索出最佳的胰酶处理时间。最佳的显带结果是三分一的分裂相显带略过，三分一的分裂相显带刚好，三分一的分裂相显带略欠。
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2染色体G显带失败标本的补救
G显带常常由于各种因素导致显带不够，不能进行准确的核型分析，可以用无水乙醇或甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液对由于胰蛋白酶消化时间短而致的失败标本进行重新处理，收到了理想的效果。
2.1无水乙醇脱色法将未经油镜观察后无香柏油的标本片放人无水乙醇中漂洗1～2 min，放在80℃烤箱烘烤10 min，取出后放人0.025%胰酶溶液中消化1 min，染色时间不变[5]。
2.2甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液脱色法将经油镜观察后有香柏油的玻片放入甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液中浸泡1 h，取出后放80℃烤箱烘烤10 min，然后进行消化、染色。消化染色时间同无水乙醇脱色法[5]。
3讨论
染色体结构或数目异常所致疾病为染色体病。现巳发现人类染色体数目和结构畸变3000余种，染色体病综合征100余个[6]。每一位染色体病患者都会对家庭、社会造成沉重的精神和经济负担，许多家庭由此因病致贫，因病返贫。检出平衡易位携带者、发现染色体异常是我们每位细胞遗传工作者的责任。同时加强产前诊断，防止染色体病患儿的出生，对提高人口素质有重大意义。
, 百拇医药
参考文献
[1]李洁，徐文瑜，杨娇英.外周血淋巴细胞培养及染色体G带标本制备的实验对策. 中国优生与遗传杂志，2006，14 (1)：5151.
[2]康晓慧.细胞生物学.北京：人民卫生出版社，2003:240241.
[3]白玉书.白玉书专辑.北京：中国人事出版社，2000:240.
[4]高丽君，宋芳，周立社,等.不同来源胰蛋白酶对染色体G显带的影响.包头:医学院学报,2006，22(1):7778.
[5]张颖珍.人体外周血染色体G显带制备时的影响因素及补救措施.中国优生优育,2010，16(5):265267.
[6]临床常见染色体病诊断手册.北京：人民卫生出版社，2001:11., 百拇医药(邱惠国 林晖 侯喜琴 赵军 宋秀宇)
1.4.5G显带技术烤片时间应根据当前的空气湿度，灵活把握时间，湿度大烤片时间可延长；湿度小烤片时间可缩短，我们实验室一般烤片时间为80℃，3 h。准备立式染色缸3个：一缸为含0.025%胰酶的磷酸盐缓冲液(pH7.4)；另两缸为生理盐水。显带时，玻片放入37℃恒温箱中预温过的0.025%胰酶溶液中处理30 s左右(具体时间应做预实验)，并不断摇动玻片，使标本均匀接触液体。然后取出迅速投入生理盐水缸中漂洗，每次3s。漂洗后的玻片用配制好的Giemsa染液染色，时间为5 min(具体时间应做预实验)，用流水冲掉染液、晾干，必要时封片、镜检。镜检时，先在低倍镜下选择分散好、长度适中的分裂相，然后转换油镜观察其显带情况。这里需要提醒的是胰酶预温时要注意预温温度，温度过高可使胰酶变性失效，温度过低胰酶活性不强，胰酶最适温度为37℃；相同浓度，来源于猪、羊、牛的胰蛋白酶在G显带中的作用不尽相同，其中牛胰蛋白酶具有使染色体拉长的作用[4]；染色体在胰酶中的处理时间可因制片质量、片龄、烤片时间长短而不同；在不同个体的染色体制片中也可有差异；在进行预实验时，应片头，片中，片尾处尽可能多观察染色体的显带情况，以便摸索出最佳的胰酶处理时间。最佳的显带结果是三分一的分裂相显带略过，三分一的分裂相显带刚好，三分一的分裂相显带略欠。
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2染色体G显带失败标本的补救
G显带常常由于各种因素导致显带不够，不能进行准确的核型分析，可以用无水乙醇或甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液对由于胰蛋白酶消化时间短而致的失败标本进行重新处理，收到了理想的效果。
2.1无水乙醇脱色法将未经油镜观察后无香柏油的标本片放人无水乙醇中漂洗1～2 min，放在80℃烤箱烘烤10 min，取出后放人0.025%胰酶溶液中消化1 min，染色时间不变[5]。
2.2甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液脱色法将经油镜观察后有香柏油的玻片放入甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液中浸泡1 h，取出后放80℃烤箱烘烤10 min，然后进行消化、染色。消化染色时间同无水乙醇脱色法[5]。
3讨论
染色体结构或数目异常所致疾病为染色体病。现巳发现人类染色体数目和结构畸变3000余种，染色体病综合征100余个[6]。每一位染色体病患者都会对家庭、社会造成沉重的精神和经济负担，许多家庭由此因病致贫，因病返贫。检出平衡易位携带者、发现染色体异常是我们每位细胞遗传工作者的责任。同时加强产前诊断，防止染色体病患儿的出生，对提高人口素质有重大意义。
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参考文献
[1]李洁，徐文瑜，杨娇英.外周血淋巴细胞培养及染色体G带标本制备的实验对策. 中国优生与遗传杂志，2006，14 (1)：5151.
[2]康晓慧.细胞生物学.北京：人民卫生出版社，2003:240241.
[3]白玉书.白玉书专辑.北京：中国人事出版社，2000:240.
[4]高丽君，宋芳，周立社,等.不同来源胰蛋白酶对染色体G显带的影响.包头:医学院学报,2006，22(1):7778.
[5]张颖珍.人体外周血染色体G显带制备时的影响因素及补救措施.中国优生优育,2010，16(5):265267.
[6]临床常见染色体病诊断手册.北京：人民卫生出版社，2001:11., 百拇医药(邱惠国 林晖 侯喜琴 赵军 宋秀宇)