重组人血管内皮抑制素冻干粉针剂的研制和质量评价(1)
 |
| 第1页 |
参见附件(3658KB，3页)。
【摘要】 目的 研究重组人血管内皮抑制素(endostar)冻干粉针剂的制备和质量控制。方法 以4 %甘露醇、2 %蔗糖、30 mm乙酸钠为辅料，将endostar制备成冻干粉针剂。分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和高效液相法(HPLC)分析冻干粉的纯度，使用人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)分析冻干粉的活性，其他检测项目按照《中国药典》进行。结果 Endostar冻干粉的纯度大于99%，生物学活性每支含量2.4×105U，等电点主区带在8.8~9.8之间，冻干粉用胰蛋白酶消化后，肽图与理化对照品一致。结论 按照此工艺制备的endostar冻干粉针剂各项指标均符合《中国药典》要求。
【关键词】
血管内皮抑制素；冻干粉；纯度；生物学活性；肽图
Production and Quality Research of Recombinant Human Endostatin Freeze-dried Powder
LIU Wu, YAO Xue-jing, LI Zhuang-lin. Shandong Simcere-Medgenn Bio-Pharmaceutical Co., Ltd, Yantai 264006, China
【Abstract】 Objective
To prepare recombinant human endostatin (endostar) freeze-dried powder and research its quality.Methods Endostar freeze-dried powder was prepared with 4 % mannitol, 2 % sucrose, 30 mM sodium acetate. The product purity was analysed by SDS-PAGE and HPLC, and biological activity was measured with HUVEC. Other test methods were performed according to chinese pharmacopoeia.Results The purity of endostar freeze-dried powder was more than 99%. The biological activity was 2.4±105U per piece and isoelectric point was between 8.8~9.8.The peptide mapping of endostar freeze-dried powder was consistent with reference substance.Conclusion Endostar freeze-dried powder prepared in accordance with the process were in line with chinese pharmacopoeia standards.
【Key words】
Endostatin; Freeze-dried powder; Purity;Biological activity;Peptide mapping
作者单位:264006烟台,山东先声麦得津生物制药有限公司
血管内皮抑制素是1997年OReilly等从小鼠血管内皮瘤的细胞培养液中分离获得的天然蛋白分子，它是内皮细胞增殖、迁移和新生血管生成的专一性抑制剂[1]，后来经证实是胶原X VIII NC1结构域C末端的多肽片段[2]。重组人血管内皮抑制素注射液于2005年9月在我国上市，主要用于非小细胞肺癌等恶性肿瘤的治疗，并且具有无毒副作用、不容易产生耐药性等优点[3, 4]。但由于重组人血管内皮抑制素水针剂需要低温储藏和冷链运输，因此其冻干粉针剂的研制和质量控制具有重要意义。
1 仪器与材料
1.1 设备、仪器和细胞
西林瓶灌装机(长沙楚天)；LYO-13冻干机(上海东富龙公司)；电泳仪(Bio-Rad公司)；CO2培养箱(Sanyo公司)；酶标仪(Thermo Scientific公司)；HP 1100型高效液相色谱仪(Agilent公司)；C18反相柱，粒度5 μm，孔径300 ，4.6 mm×25 cm(Vydac公司)；HUVEC细胞株(本室保存)。
1.2 药品和试剂
Endostar原药(批号YY2009024，浓度10.2 mg/ml)、理化对照品(批号BZ08013，浓度2.64 mg/ml)、活性标准品(批号BZ09001，每支7.5 mg，含1.2×105U活性单位)均为山东先声麦得津生物制药有限公司生产；内皮细胞培养基(ECM)(Sciencell公司)；胰蛋白酶(Sigma公司)；三氟乙酸，分析纯，(E. Merk公司)；乙腈，色谱纯(Fisher Scientific公司)；甘露醇(山东洁晶集团)；蔗糖(湖南尔康制药)；三水合乙酸钠(北京燕京药业)；MTS染料(Sigma公司)；其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 Endostar冻干粉针剂制备工艺
取Endostar原药3 L ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(3658KB，3页)。