星形胶质细胞在坐骨神经分支选择性结扎神经病理性痛中的作用(2)
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1.4 分组及给药 大鼠随机分组为4组(6只/组)：SNI组(制作SNI动物模型，同时行鞘内置管术，术后13 d鞘内给予生理盐水10 μl)；假手术组(仅暴露大鼠坐骨神经主干及其分支，不结扎切断，其余处理方式同SNI组)；L,α,aminoadipate(LAA)组(制作SNI动物模型，同时行鞘内置管，术后13 d鞘内给予LAA 10 μl)；对照组大鼠不施加任何处理因素。
LAA药物配置：以生理盐水配制浓度为100 nmol/10 μl。
1.5 神经病理性痛阈值的检测 术前2 d及术后14 d进行疼痛阈值检测。检测热痛阈时将大鼠置于铁架的玻璃板上，罩以透明的有机玻璃罩，适应15 min后测试。卤素投射灯从玻璃板下方照射足底，功率100 W、电压10 mV、光圈直径5 mm。记录大鼠出现缩足反应的时间(s)，照射上限40 s，以免灼伤足底。重复测量3次取平均值，同一足底两次测试间隔不低于10 min，同一大鼠双侧足底测试间隔不低于5 min。检测机械性痛阈时将大鼠置于铁架的铁丝网上，罩以透明有机玻璃罩，适应15 min后以von Frey纤维丝由弱到强刺激足底，每个强度刺激重复10次，出现5次以上缩足反射视为阳性反应。记录大鼠出现阳性反应的最小刺激强度。
1.6 Real,time PCR检测大鼠脊髓背角GFAP变化 行为学测试之后，以60 mg/kg的剂量腹腔注射4%戊巴比妥钠溶液麻醉大鼠，迅速剥离脊髓腰膨大部分，以液氮稍冷后分离腹背侧，参照文献反转录脊髓背角GFAP mRNA，利用公式2,delta delta Ct对数据结果进行分析[4]。
1.7 统计学分析 数值以均数± 标准差表示，利用SPSS 17.0行单因素方差分析LSD检验，P<0.05具有统计学意义。
2 结果
2.1 鞘内注射LAA可缓解SNI大鼠神经病理性痛 术前2 d各组大鼠机械痛域及热痛阈均无明显差别(P> 0.05)。术后14 d，与对照组相比，假手术组机械痛域及热痛阈均无明显变化(P> 0.05)，SNI组大鼠机械痛域及热痛阈较对照组均明显降低(P<0.05)，出现了明显的神经病理性痛；鞘内注射LAA可缓解SNI大鼠神经病理性痛，LAA组机械痛域及热痛阈均高于SNI组(P<0.05)(表1，表2)。
2.2 鞘内注射LAA抑制SNI大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化 GFAP是重要的星形胶质细胞活性标志物。Real,time PCR检测显示，与对照组相比，假手术组脊髓背角GFAP mRNA无明显变化(P> 0.05)；SNI组脊髓背角GFAP mRNA较对照组升高了18.3%(P<0.05)，星形胶质细胞明显活化；鞘内注射LAA可明显抑制SNI大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化，LAA组GFAP mRNA较SNI组下降了17.5%(P<0.05)(图1)。
3 讨论
神经病理性痛是由于神经系统病变或功能障碍引发的痛觉，由于神经病理性痛发病机制不清，临床一直缺乏有效的治疗手段[1]。传统理论认为，神经元结构和功能异常导致了神经病理性痛的产生和持续，但最近有研究表明，星形胶质细胞可能在神经病理性痛的产生与维持中发挥了重要作用[2]，这为神经病理性痛的防治提出了新的研究方向。SNI动物模型被广泛用于神经病理性痛的研究，术后14 d神经病理性痛达高峰[3]，因此本实验对SNI术后14 d大鼠进行了研究。结果显示，SNI大鼠术后14 d热痛阈及机械痛域较对照组均明显降低，出现了明显的神经病理性痛表现，GFAP作为星形胶质细胞活化的重要标志，在SNI大鼠脊髓背角明显增高。LAA是星形胶质细胞特异性毒素，可抑制星形胶质细胞活性。本研究显示，LAA组大鼠脊髓背角GFAP mRNA较SNI组明显降低，热痛阈及机械痛域较SNI组均明显增高，表明LAA抑制SNI大鼠脊髓背角星形胶质细胞活化明显缓解了神经病理性痛，提示脊髓背角星形胶质细胞活化是SNI大鼠神经病理性痛的重要机制之一。
本实验没有深入研究脊髓背角星形胶质细胞参与SNI大鼠神经病理性痛的机制，但有研究表明，星形胶质细胞活化会释放一氧化氮、兴奋性氨基酸、白细胞介素,1β、白细胞介素,6以及肿瘤坏死因子,α等，可以与神经元上的相应受体结合，从而增强神经元兴奋性[5]。这可能是星形胶质细胞活化参与神经病理性痛的重要机制之一。
参 考 文 献
[1] Zimmermann M. Pathobiology of neuropathic pain ......
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