PTEN、CyclinD1蛋白在宫颈鳞癌中的表达
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【摘要】 目的 探讨PTEN、CyclinD1蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义。方法 对我院45例宫颈鳞癌患者及45例健康体检患者，分别检测PTEN和CyclinD1蛋白，并对其结果进行分析总结。结果 我院45例宫颈鳞癌患者PTEN阳性13例占28.9%、阴性32例占71.1%，45例健康体检患者PTEN阳性43例占95.6%、阴性2例占4.4%；45例宫颈鳞癌患者CyclinD1阳性29例占64.4%、阴性16例占35.6%，45例健康体检患者CyclinD1阳性0例、阴性45例占100%。在宫颈鳞癌组织CyclinD1的阳性表达率与组织学分级有关，低分化期阳性率明显高于高中分化期。与临床分期也有关，临床Ⅲ期表达率明显高于Ⅰ期~Ⅱ期。PTEN的阳性表达率随组织学分级的增加而下降，低分化期阳性率明显低于高中分化期，随临床期别的增高而降低，临床Ⅲ期表达率明显低于Ⅰ期~Ⅱ期。结论 PTEN和CyclinD1蛋白可作为临床诊断宫颈鳞癌的发展，早期诊断和科学评价肿瘤预后、指导临床治疗的生物学观察指标。
【关键词】 宫颈鳞癌；PTEN；CyclinD1蛋白
宫颈癌是女性常见恶性肿瘤，宫颈癌的发生与发展是多因素多阶段演变的结果，多种癌基因及抑癌基因参与了癌变过程。细胞的异常增殖涉及抑癌基因功能的失活和癌基因的激活，PTEN作为编码具有磷酸酶活性产物的抑癌基因在细胞周期G1期的负调控中起着重要的作用，CyclinD1是G1/S期转换中正性调控因子，其过度表达可导致细胞异常增殖。PTEN 又称为(MMAC1/TEP1)基因[1]，是至今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，在调控细胞生长及细胞调亡过程中发挥重要作用，并与肿瘤细胞的侵袭、转移能力密切相关。现对我院45例宫颈鳞癌患者采用免疫组化技术检测PTEN和CyclinD1蛋白，并分析健康组织与宫颈鳞癌组织之间的关系，如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 我院就诊的45例宫颈鳞癌患者，高分化7例、中分化15例、低分化23例，临床分期采用1995 年FIGO 标准，Ⅰ期11例、Ⅱ期21例、Ⅲ期13例。淋巴结转移14例、无淋巴结转移31例。患者年龄在32~71岁之间，平均约为47.6岁。所有宫颈鳞癌患者手术前均未接受过放疗或化疗。
1.2 检测方法及试剂 PTEN 多单克隆抗体为NeoMarkers(RB, 9294) 公司产品，稀释度为1∶50。CyclinD1蛋白单克隆抗体(即用型) 和SP 试剂盒均购于北京中杉生物公司。SP 试剂盒及PBS 显色剂均购自北京鼎国生物公司。免疫组化(SP法)组织蜡块作做4 μm 连续切片，烤片后脱蜡和水化，3%H2O2 孵育10 min，灭活内源性过氧化物酶，高压抗原修复20 min。SP 三步法进行染色，PBS显色，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封固。
1.3 结果判断 PTEN以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性着色，随机选择10个高倍视野，计数1000个肿瘤细胞，按阳性细胞所占百分比确定分级如下：阳性细胞数<10%为阴性表达, 阳性细胞数≥10%为阳性表达。CyclinD1染色后棕黄色颗粒位于细胞核为阳性，按阳性细胞所占百分比确定分级如下：阳性细胞数<5%为阴性表达, 阳性细胞数≥5%为阳性表达。
1.4 方法 现对我院45例宫颈鳞癌患者及45例健康体检患者，分别检测PTEN和CyclinD1蛋白，并对其结果进行分析总结。(两组患者性别、年龄经比较均差异无统计学意义(P<0.05),具有可比性。
1.5 统计学方法 应用SPSS 13.0统计软件采用χ2检验对资料进行分析，P<0.05为差异无统计学意义。
2 结果
2.1 现对我院45例宫颈鳞癌患者及45例健康体检患者，分别检测PTEN和CyclinD1蛋白其结果如下：见表1(P<0.05)。
总结，我院45例宫颈鳞癌患者PTEN阳性13例占28.9%、阴性32例占71.1%，45例健康体检患者PTEN阳性43例占95.6%、阴性2例占4.4%；45例宫颈鳞癌患者CyclinD1阳性29例占64.4%、阴性16例占35.6%，45例健康体检患者CyclinD1阳性0例、阴性45例占100%。
2.2 分析PTEN和CyclinD1蛋白在宫颈鳞癌中的表达与临床病理参数之间的关系，见表2。
总结，在宫颈鳞癌组织CyclinD1的阳性表达率与组织学分级有关，低分化期阳性率明显高于高中分化期。与临床分期也有关，临床Ⅲ期表达率明显高于Ⅰ期,Ⅱ期。PTEN的阳性表达率随组织学分级的增加而下降，低分化期阳性率明显低于高中分化期，随临床期别的增高而降低，临床Ⅲ期表达率明显低于Ⅰ期,Ⅱ期，有统计学意义。
3 讨论
宫颈癌是全球妇女中仅次于乳腺癌的第二大常见恶性肿瘤，在发展中国家女性中其发病率居第一，据世界范围内的统计，每年大约有50万宫颈癌新发病例，占所有癌症新发病例的15%，因此研究多种肿瘤相关因子与宫颈癌发生与发展的关系尤为重要[2]。
PTEN 是迄今为止发现的第1 个具有双特异性磷酸激酶活性的抑癌基因。PTEN 作为磷脂酰肌醇(PI) 三磷酸酶，通过拮抗PI3K 信号导致PIP3 的肌醇环中D3位点的去磷酸化并由此灭活下游信号，从而抑制PIP3 /Akt (PKB) 信号传导途径[3]。而在细胞粘连依赖信号中，PTEN 通过其脂质磷酸酶活性调节FAK和Shc 的磷酸化而影响细胞的粘连和迁移，抑制肿瘤细胞的浸润和转移。目前认为在肿瘤细胞形成的六项基本要素：逃逸凋亡、足够的自生生长信号、对抗生长信号不敏感、促进血管生长、浸润和转移和持续复制电位中，PIP3 信号至少涉及此六项中前五种信号的调节[4]。CyclinD1 是重要的细胞周期调控蛋白，它参与细胞周期的精确调控，维持细胞正常生长发育平衡。一旦CyclinD1 基因发生改变，就有可能导致细胞周期的异常调控，最终导致细胞转化甚至癌变。实验表明，CyclinD1 可以促进G1/S 期转换而加速细胞周期过程。其调节作用与抑癌基因蛋白pRb 磷酸化密切相关，两者形成一个调节环路。在G1 期，CDK4、CDK6 与CyclinD1 形成复合物。D1 蛋白通过与CDK4(或CDK6) 结合后激活后者，使之磷酸化一系列底物，如pRb 等。磷酸化的pRb 即释放与之结合的E2F，导致DNA 开始合成，促使细胞由G1 期进入S 期。当D1 蛋白过表达时，可使细胞持续性增殖,最终形成肿瘤[5]。肿瘤细胞区别于正常细胞的基本特征是细胞生长失控和分化受阻，而其内在的原因则是由于基因突变，包括基因的点突变、缺失、截断以及扩增等。
本研究显示：我院45例宫颈鳞癌患者PTEN阳性13例占28.9%、阴性32例占71.1%，45例健康体检患者PTEN阳性43例占95.6%、阴性2例占4.4%；45例宫颈鳞癌患者CyclinD1阳性29例占64.4%、阴性16例占35.6%，45例健康体检患者CyclinD1阳性0例、阴性45例占100%。在宫颈鳞癌组织CyclinD1的阳性表达率与组织学分级有关 ......
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