8羟基脱氧鸟苷在2型糖尿病大鼠肾脏的表达及瑞舒伐他汀钙的影响(2)
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参见附件。
1.2.2.2 肾组织中MDA含量、SOD活性的测定 取0.5 ml组织匀浆，低温离心，取上清液，采用化学比色法测定光吸收度，计算MDA、SOD含量。
1.2.2.3 肾组织免疫学检查 常规脱蜡，封闭，一抗37℃孵育2 h，4℃冰箱过夜，标记二抗，作免疫染色，应用高清晰度彩色免疫图像分析系统(IPP55.0)分析，测定肾小球(平均光密度)直径。
1.2.2.4 肾脏组织电镜观察 肾组织固定，脱水，包埋，切片，染色，在Hitachi-7500透射电镜下观察。
1.3 统计学方法
实验数据以x±s表示，应用SPSS 13统计软件进行处理，两组间数据采用ANOVA检验，若方差不齐，采用非参数统计检验，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 各组大鼠血糖、肾功能及病理形态的变化
与C组相比，D组大鼠经高糖、高脂饮食喂养4周后，经腹腔注射STZ后，血糖明显升高，达到糖尿病模型标准, 造模8周后，D组尿ALB,BUN、Cr值，肾重/体重与C组比较明显升高；经可定治疗后，N组体重有明显增长，肾脏重量虽无明显变化(P>0.05)，但其肾重及肾重/体重均明显低于D组(P<0.05)。
2.2 正常对照组、糖尿病组、糖尿病可定治疗组病理改变
镜下观察发现，D组大鼠GBM明显增厚，系膜区增宽，部分肾小球出现硬化，经可定治疗后，上述病理改变得到改善。
2.3 正常对照组、糖尿病组、糖尿病可定治疗组超微结构改变
电镜下观察可见，C组肾小球基底膜结构清晰完整，血管内皮细胞足细胞未见异常。D组基底膜不均匀增厚，内皮细胞排列紊乱，脱落，完整性破坏，足突增粗融合。肾小管上皮肿胀。部分溶酶体内可见空泡变性，线粒体肿胀。N组亦可见上述变性，但程度较D组减轻。
2.4 各组大鼠肾组织中MDA含量、SOD活性及8-羟基脱氧尿苷(8-OHdG)的变化
3 讨论
氧化应激是指机体内高活性分子如活性氧类自由基(reactive oxygen species,ROS)和活性氮类自由基(reactive nitrogen species,RNS)产生过多或消除减少，过多的自由基直接引起生物膜脂质过氧化，细胞内蛋白质及酶变性，DNA损伤，从而导致细胞死亡或凋亡，组织受损。
本研究发现，12周后，糖尿病大鼠各种氧化应激指标包括MDA和8-OHdG都明显增高，而抗氧化指标SOD则明显低于正常对照，说明2型糖尿病大鼠的抗氧化能力明显下降，氧自由基生成增多，促进了糖尿病的发生，这与近年的其他研究一致[1,2]。
本研究还表明糖尿病的氧化应激与糖尿病肾病的发生存在密切关系，2型糖尿病大鼠成模12周后，BUN，Cr和ALB升高，DBM增厚，系膜区明显增宽，部分肾小球出现硬化，足突成阶段性融合，说明高糖状态下肾脏功能和形态均受到损伤。相关分析表明糖尿病大鼠尿白蛋白排量与8-OHdG和 MDA呈正相关，与SOD呈负相关, 说明氧化应激参与了糖尿病肾病的发生发展[3]。Chang JM等[4]发现局部氧自由基水平与肾小球硬化和系膜增生相关，在糖尿病发展中起重要作用。因此，抗氧化治疗可减轻DM引起的肾脏损伤。
8-OHdG被认为是DNA氧化应激损伤的重要标志物[5,6]。当机体修复机制正常时，这种DNA氧化损伤产物被机体的特异性DNA修复酶hOGG1等从DNA链上切除并重新渗入正常的鸟嘌呤碱基而经肾脏随尿排泄，因而其含量可以反映机体的DNA氧化损伤程度，是目前国际上公认的一种新型的评价机体的DNA氧化损伤和机体氧化应激状态的敏感指标和生物标志物。近年研究发现糖尿病肾病时8-OHdG表达明显增高[7]，是肾小球细胞蛋白质氧化应激的指标。本研究发现成模后的2型糖尿病大鼠肾脏的8-OHdG表达明显高于正常组(P<0.05)并与24 h尿白蛋白排量密切相关，说明DNA的氧化损伤和糖尿病肾病有着密切的联系，其参与了DN的发生和发展,氧化应激在糖尿病肾病的发病机制中起重要作用。
本研究通过瑞舒伐他汀钙干预2型糖尿病大鼠模型。造模12周后，发现瑞舒伐他汀钙治疗组氧化指标MDA的水平明显减少,SOD的含量增加，同时使尿白蛋白水平下降，肾脏病理和超微结构都有明显的好转，表明其改善了氧化应激状态，缓解了肾损伤，保护了肾脏功能。瑞舒伐他汀钙自上市以来，主要作为降胆固醇及抗动脉硬化药。近年来，大量资料表明，瑞舒伐他汀钙的强抗氧化作用较其降脂作用更强。Yoshida M等均发现瑞舒伐他汀钙对体内脂质有较强的抗氧化作用[8,9]，Umeji K等[10]在一些干预动脉硬化的实验中发现可定能够减少8-OHdG的含量，其机制为通过减少NADPH的氧化反映来减少ROS的含量。但有关瑞舒伐他汀钙干预肾脏8-OHdG表达国内外未见类似报道。本实验就对此问题进行了研究，实验发现瑞舒伐他汀钙治疗组肾脏8-OhdG的表达较糖尿病组明显下降(P<0.05)，初步证实了瑞舒伐他汀钙可以改善肾脏DNA的损伤，减轻肾脏氧化应激的损害。
总之，通过此次实验证实，评估糖尿病的氧化应激水平对预测和预防其并发症是很重要的。瑞舒伐他汀钙作为一种抗氧化剂不仅可以抑制脂质过氧化物的生成亦可以抑制DNA的氧化损伤，其临床前景值得进一步探讨研究。
参 考 文 献
[1] Xu Y Z, Brent W, Osborne, et al ......
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