翻白草黄酮对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠保护作用(1)
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参见附件。
【摘要】 目的 通过观察翻白草(PDB)黄酮对2型糖尿病(T2-DM)胰岛素抵抗(IR)大鼠的空腹血糖(FPG)、血清胰岛素水平(INS)、胰岛素敏感指数(ISI)、血清过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)活性的影响，探讨翻白草黄酮对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠的保护作用。方法 采用高脂高糖饲料喂养6周后加链脲佐菌素腹腔注射(40 mg/kg)复制2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型，造模成功后动物再随机分为模型组、翻白草黄酮低剂量组(80 mg/kg)、翻白草黄酮中剂量组(160 mg/kg)、翻白草黄酮高剂量组(320 mg/kg)和二甲双胍(DMBG)组，连续给药12周。结果 与模型组比较，翻白草黄酮能够降低2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠空腹血糖，提高空腹胰岛素水平和胰岛素敏感指数，提高血清过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力，降低血清丙二醛含量。结论 翻白草黄酮是通过降低血糖、改善胰岛素抵抗、提高抗氧化应激功能来实现对2型糖尿病胰岛素抵抗的保护作用。
翻白草 (Potentilla Discolor Bunge)又名天青地白草，鸡脚儿；属蔷薇科植物，为多年生草本，用其全草及根入药。其味甘、微苦，性平，无毒，翻白草归肝、胃、大肠经。翻白草因可清除“消渴”患者的燥热，燥热既除，则津液自生，达到清热润燥、养阴生津之目的，故能有效缓解“消渴”之症状。翻白草其根含有水解鞣质和缩合鞣质，全草含有延胡索酸、没食子酸、原儿茶酸、槲皮素、柚皮素等[1]。植株各部分均含黄酮类化合物，其总黄酮量含量高，其中槲皮素占总黄酮量约2.75%[2]。观察翻白草黄酮对T2DM胰岛素抵抗的保护作用，为其临床开发提供理论依据。
1 材料与仪器
1.1 试验药物及试剂
翻白草黄酮：选择江西产两年生翻白草为研究原药，由江西中医学院基础医学院提取得翻白草黄酮；链脲佐菌素(StrePtozotoein，STZ)，美国Sigma公司提供；盐酸二甲双胍片，贵州天安药业公司提供；胰岛素(Insulin，Ins)放射免疫分析试剂盒：北京华英生物技术研究所提供；CAT、GSH-Px、MDA试剂盒，南京建成生物研究所提供；
1.2 试验动物 SD大鼠，雄性，体重(180±20)g，由江西中医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(赣)2005-0001
1.3 仪器 罗氏血糖测定仪及配套试纸条；r-911全自动放免计数仪；Thermo酶标仪；TD25-WS多管架自动平衡离心机；JA1203N型电子天平；CU600型电热恒温水箱。
2 方法
2.1 分组与造模[3-4]
2.1.1 高脂高糖饲料喂养
全部大鼠均先普通饲料适应性喂养3 d后，再按随机分组原则分为两组，即正常对照组(n=10只)和造模组(n=80只)，并分别给予普通饲料和高脂高糖饲料喂养。实验期间所有大鼠均分笼饲养，每5只大鼠为一笼，饲养温度保持在2~-24℃之间，相对湿度在40%~70%之间，自由饮食饮水，昼夜交替明暗时间12/12 h。
2.1.2 链脲佐菌素诱导Ⅱ型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型的建立
高脂高糖饲料喂养6周后，隔夜禁食12 h，造模组大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素40 mg/kg体重(STZ，临用前用pH4.4，0.1 mol/L枸橼酸盐缓冲液配制)，正常对照组大鼠仅空腹腹腔注射相同剂量的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液。注射STZ后1周，用血糖仪监测大鼠尾尖血糖，筛选出血糖>16.7 mmol/L作为糖尿病大鼠，不合标准大鼠剔除。
2.1.3 分组及给药
取造模成功大鼠60只，随机分为模型组、翻白草黄酮低剂量组(80 mg/kg)、翻白草黄酮中剂量组(160 mg/kg)、翻白草黄酮高剂量组(320 mg/kg)和二甲双胍(DMBG)组，连续给药12周，模型组给予等量蒸馏水。
2.2 检测指标
2.2.1 FBG检测 采用美国罗氏血糖测定仪测定。
2.2.2 血液指标测定 于末次给药后24 h，眼眶静脉丛采血，离心取上清液，-20℃保存，放射免疫法测定血清INS含量；采用分光光度法测定血清CAT含量；采用二硫代二硝基苯甲酸法测定血清GSH-Px含量；采用硫代巴比妥法测定血清MDA含量。
2.2.3 胰岛素敏感指数：ISI[5]=Ln[1/(空腹血糖 空腹胰岛素)]
2.3 统计方法
所用计量资料用(x±s)表示，采用SPSS 13.0 for windows统计软件进行数据分析，计量资料组间比较采用One-Way ANOVA。
3 结果
3.1 翻白草黄酮对T2DM胰岛素抵抗大鼠FBG、INS及ISI的影响
与正常对照组比较，模型组大鼠空腹FBG水平，INS水平以及ISI显著升高(P<0.01)；与模型组比较，PDB中剂量、高剂量空腹FBG水平显著降低(P<0.01～0.05)；PDB低剂量、高剂量空腹INS水平显著降低(P<0.05)；PDB中剂量、高剂量ISI显著降低(P<0.05)。
3.2 翻白草黄酮对T2DM胰岛素抵抗大鼠血清CAT活力的影响
与正常对照组比较，模型组血清CAT活力显著降低(P<0.01)；与模型组比较PDB各剂量组血清CAT活力显著升高(P<0.05)。
3.3 翻白草黄酮对T2DM胰岛素抵抗大鼠血清GSH-Px活力的影响
与正常对照组比较，模型组大鼠血清GSH-Px活力显著降低(P<0.01)；与模型组比较，PDB中剂量、高剂量血清GSH-Px活力显著升高(P<0.01～0.05)。
3.4 翻白草黄酮对T2DM胰岛素抵抗大鼠血清MDA含量的影响
与正常对照组比较，模型组大鼠血清MDA含量显著升高(P<0.01)；与模型组比较PDB各剂量组血清MDA含量显著降低(P<0.01)。
4 讨论
机体存在氧化应激-抗氧化防御系统，正常生理条件下机体产生的氧化应激产物可以被抗氧化系统迅速清除。糖代谢紊乱导致体内葡萄糖自身氧化、蛋白非酶糖化及肾素-血管紧张素系统激活等因素，体内产生大量活性氧族(R0 s)，使机体抗氧化酶活性降低，从而产生明显的氧化应激[6]。糖尿病持续高糖状态使得氧化应激水平增高，大大超过机体的清除能力 ......
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