高糖中膀胱ICCs的变化(1)
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【摘要】 目的 观察高糖环境下豚鼠膀胱Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal，ICCs)内钙离子荧光及其超微结构的改变，探讨糖尿病膀胱(DCP)的发病机制。方法 采用原代培养, 激光共聚焦、透射电镜观察5、10、15 mmol/L葡萄糖浓度培养24、72 h的ICCs，扫描记录胞内荧光强度值，观察其超微结构。结果 糖浓度增高培养时间延长，ICCs内钙离子荧光值升高，胞内线粒体大小不等、数量减少、空泡样变甚至溶解，胞质广泛溶解，突起消失。结论 高糖环境对豚鼠膀胱ICCs电生理学、超微结构造成显著影响，这种改变可能是造成DCP发病的重要原因之一。
【关键词】
Cajal间质细胞；高糖环境；钙离子；糖尿病膀胱；超微结构
The changes of high glucose on ICCs
FAN Yonghong. Department of Urology, The First Peoples Hospital of Pingdingshan,Henan 467000,China
【Abstract】 Objective
To observe a high glucose environment in guinea pig bladder of interstitial cells of Cajal (interstitial cells of Cajal, ICCs) Ca2+ fluorescence changes of diabetic bladder (diabetic, cystopathy, DCP) in the pathogenesis and ultrastructural. Methods Primary culture ICCs bladder cells observe ICCs at different concentrations(5,10,15 mol/L) and different times(24,72 h), by confocal laser scanning technology and transmission electron microscope, get the calcium fluorescence titer and their ultrastructural of ICCs. Results With the of increased glucose concentration, the duration of culture, ICCs Ca2+ fluorescence values increased. Their mitochondrion were inequality of size, abated of quantity, cavity affected and even dissolution. Cytoplasm were deliquesced generally,scabrosity vanished.Conclusion High glucose environment on guinea pig bladder ICCs electrophysiology and ultrastructural have a significant impact, such alterations may be one of the important reasons causing the onset of DCP.
【Key words】
Cajal interstitial cells; High glucose environment; Calcium ion;Diabetic bladder;Ultrastructural
作为膀胱慢波活动的起搏器和传导者，ICCs在去除其调控和影响因素的干扰后，仍然可以发生自发性兴奋和收缩[1，2]。因此推测：ICCs生功能的改变可能是DCP发病原因之一。而离体的Cajal间质细胞在高糖环境下变化的研究尚未见报道。本研究通过单细胞培养方法来观察高糖环境对 ICCs细胞内钙信号及其超微结构的影响，以探索DCP发病的细胞生物学机制。
1 材料及方法
1.1 材料与试剂
健康豚鼠。激光共聚焦显微镜，透射电镜，钙离子荧光剂Fluo4 AM。
1.2 方法
1.2.1 单细胞培养豚鼠膀胱ICCs细胞
脱臼处死取膀胱，取肌层并剪成碎块，胶原酶V消化后DMEM接种于培养皿，普通培养箱中培养24 h后换以含葡萄糖5、10、15 mmol/L的细胞培养液继续分别培养24 h、72 h。刮取ICCs细胞离心，戊二醛固定细胞团。
1.2.2 共聚焦显微镜观察
取Fluo4AM原液制成5 μmol/L的工作液。共聚焦培养皿中ICCs加入工作液孵育 ......
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