芪柴护肝颗粒的制备与质量控制
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【摘要】目的制备芪柴护肝颗粒，建立其质量控制方法。方法以黄芪、柴胡、丹参、枸杞等药制成芪柴护肝颗粒，用薄层色谱方法对黄芪、柴胡、丹参、枸杞进行鉴别。结果在薄层色谱中均能检出黄芪甲苷、原儿茶醛、柴胡、枸杞子,且色谱斑点清晰,重现性好、专属性强。结论本品制备工艺可靠，质量可控。
【关键词】芪柴护肝颗粒；制备；薄层色谱；质量控制
作者单位：453003河南新乡医学院第三附属医院(常吉梅)；河南新乡市传染病医院(常娟)芪柴护肝汤由黄芪、柴胡、郁金、丹参、枸杞等十七味中药组成，具有健脾益气、养血活血、清热解毒除湿的功效。临床上用于治疗慢性乙型肝炎,效果良好。为了进一步对芪柴护肝汤进行研究开发，我们将芪柴护肝汤制成芪柴护肝颗粒，下面报告芪柴护肝颗粒的制备和质量控制方法研究。
1材料
1.1药品与试剂黄芪甲苷对照品(批号110781-200613)、原儿茶醛对照品(批号110810-200506)、柴胡对照药材(批号120992-200605)、枸杞子对照药材(批号121072-200505)均由中国药品生物制品检定所提供;硅胶G(青岛海洋化工厂); 芪柴护肝颗粒(自制，批号20100412、20100521、20100616)；阴性样品(自制,按处方药味除去被测药材制备而成);试剂均为分析纯。
1.2仪器ZF1型三用紫外分析仪(上海顾村电器厂)、TG328A型电光分析天平(上海医用激光仪器厂)、TCQ250型超声波清洗器(北京医疗设备二厂)、薄层层析仪(100×100 mm,上海信仪玻璃仪器厂)。
2处方与制备
2.1处方组成黄芪60 g醋柴胡36 g郁金36 g丹参60 g土茯苓48 g白花蛇舌草36 g虎杖36 g茯苓36 g半夏36 g陈皮36 g山药36 g焦鸡内金36 g焦山楂36 g当归36 g白芍36枸杞子48炙甘草12 g。
2.2制备
2.2.1将丹参粉碎成粗颗粒,用80%的乙醇热回流提取两次(第1次加4倍量乙醇,回流提取3 h;第2次加3倍量乙醇,回流提取2 h),滤过,合并2次滤液,减压回收乙醇得浸膏备用。
2.2.2其余药与乙醇回流提取过的药渣共同加水浸渍1 h,加热提取2次(第1次加10倍量水,煎煮2 h;第2次加8倍量水,煎煮1.5 h),滤过,合并滤液,减压浓缩至适量(1∶1.5),放出,按10%的量加入5% 101果汁澄清剂,搅匀,静置冷藏24 h,虹吸上清液,再减压浓缩至相对密度为1.32~1.35(80℃)的浸膏,与备用浸膏合并后加蔗糖粉及糊精,混匀,制成软材,制颗粒,干燥,制成1 000 g,即得。
3质量控制
3.1性状本品为黄棕色至棕褐色颗粒,气微,味甜、微酸。
3.2鉴别
3.2.1黄芪的鉴别取本品40 g,研细,加甲醇100 ml,超声提取1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加水30 ml使溶解,用乙醚提取2次(20、20 ml),弃去乙醚液,再用水饱和的正丁醇提取3次(30、20、20 ml),合并提取液,用正丁醇饱和的1%氢氧化钠溶液洗涤3次(20、20、15 ml),弃去碱液,继用正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成1 mg/ml的溶液,作为对照品溶液。并将阴性样品同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验[1],吸取上述3种溶液各4 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(10∶20∶11∶5)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热约5 min。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同棕褐色斑点;置紫外光灯(365 nm)下检视,显相同的橙黄色斑点,阴性对照试验证明无干扰。
3.2.2柴胡的鉴别取柴胡对照药材1.5 g,照黄芪鉴别项下的方法制成柴胡对照药材溶液。并将阴性样品同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验[1],吸取上述3溶液各4 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(7∶3∶1)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液, 105℃加热数分钟,供试品色谱中,在与对照药材相应的位置上显两个相同的粉红色斑点,阴性对照试验证明无干扰。
3.2.3枸杞子的薄层鉴别取本品30 g,研细,加水100 ml使溶解,加三氯甲烷摇提取2次,每次40 ml,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1 g,加水20 ml,煎煮10 min,滤过,滤液加三氯甲烷振摇提取2次,每次20 ml,合并三氯甲烷液,蒸干,残渣加甲醇1 ml使溶解,作为对照药材溶液。并将阴性样品同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验[1],吸取上述3种溶液各5 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶5∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中在与对照药材色谱相应位置显相同的蓝色荧光斑点(阴性对照无此斑点)。
3.2.4丹参的薄层鉴别取本品30 g加水100 ml使溶解,加盐酸调pH值至2,加乙醚提取2次,每次30 ml,乙醚液蒸干,残渣加乙醇1 ml使溶解,作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作为对照品溶液。并将阴性样品同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[1],吸取上述3种溶液各3 μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-丙酮-甲酸(12∶1∶0.4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铁-1%铁氰化钾(1∶1)的混合溶液。供试品色谱中在与对照品色谱相应位置显相同颜色的蓝色斑点(阴性对照无此斑点)。
3.2.5其他检查应符合《中国药典》2005年版一部附录颗粒剂项下有关的各项规定[1]。
4讨论
4.1芪柴护肝颗粒主要以水为溶剂提取,所含成分以水溶性为主,故本实验选用黄芪、柴胡、丹参、枸杞子所含的水溶性成分进行鉴别研究。研究证明柴胡有明显的消炎、利胆和抗病毒功能[2]；黄芪有免疫调节、抗肝纤维化和抗病毒等方面的药理作用[3]; 丹参能减轻肝细胞损害和促进其修复[4]; 枸杞多糖有良好的保护肝脏作用[5];对它们的鉴别研究可确保该制剂的质量及疗效。
4.2由于黄芪与柴胡所含有效成分黄芪甲苷、柴胡皂苷均为三萜皂苷,故我们选用同一种提取方法制备的供试品溶液,即可对两种药材分别进行TLC鉴别。在对黄芪进行试验时,原展开剂为三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10),虽可将黄芪甲苷检出,但Rf>0.95,且斑点呈扁圆形,经选用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(10∶20∶11∶5)10℃以下放置的下层溶液为展开剂[6],展开时温度控制在30℃以下,湿度45% ~58%,所得斑点Rf值适中,圆而清晰 ......
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