慢性轻度不可预见性应激对支气管哮喘大鼠的影响
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【摘要】 目的 观察慢性轻度不可预见性应激对支气管哮喘大鼠哮喘病情的影响。方法 通过对哮喘组及实验组大鼠腹腔注射卵蛋白，并雾化吸入卵蛋白制备支气管哮喘模型。在雾化吸入卵蛋白后对实验组进行连续28 d的慢性轻度不可预见性应激。此后以无创小动物呼吸功能测量仪检测大鼠呼吸功能、HE染色观察肺组织病变、并支气管灌洗液中细胞数量及分类。结果 ①与正常组比较，哮喘组呼吸功能降低(P<0.05)；与哮喘组比较，哮喘组大鼠呼吸功能进一步降低(P<0.05)。② 与正常组比较，哮喘组大鼠支气管灌洗液中白细胞总数及嗜酸性粒细胞均显著升高(P<0.05)；与哮喘组比较，哮喘组大鼠支气管灌洗液中白细胞总数及嗜酸性粒细胞均显著升高(P<0.05)。③ 与哮喘组大鼠比较，实验组大鼠支气管壁上皮细胞较哮喘组排列更加紊乱，部分结构破坏，白细胞浸润较哮喘组更加显著，肺泡失去正常形态。结论 慢性轻度不可预见性应激可以通过加重哮喘病情，临床工作中应注重对哮喘患者进行心理疏导、避免心理应激。
【关键词】 支气管哮喘；慢性轻度不可预见性应激；影响；大鼠
1 材料与方法
1.1 实验动物 SD大鼠30只，雄性，体重160～200 g，购自山东中医药大学实验动物中心。随机分为3组：正常组、哮喘组、实验组，每组10只。除慢性轻度不可预见性应激，大鼠自由摄食，恒温饲养。
1.2 主要试剂 卵蛋白购自美国Sigma公司。
1.3 模型的制备 哮喘组、哮喘伴发抑郁行为组，腹腔注射卵蛋白溶液 100 mg，1周后重复注射一次。2周后大鼠接受1%卵蛋白雾化吸入(通过雾化器)，每天一次，每次30 min，连续3周。雾化吸入 OVA后，大鼠继续接受28 d 慢性轻度不可预见性应激刺激，包括禁水24 h，禁食24 h，夹尾3 min，制动2 h，4 ℃冷水游泳5 min，45 ℃热环境5 min，30 V电压电击足底电击120 s，闪光刺激、昼夜颠倒、间断光照，噪音干扰2 h，单笼饲养、鼠笼倾斜、潮湿垫料等，每种刺激随机使用。
1.4 指标检测
1.4.1 呼吸功能测定 通过小动物呼吸功能测量仪，于对大鼠给予慢性轻度不可预见性应激后测量各组大鼠的吸气阻力、呼气阻力及肺顺应性。
1.4.2 支气管肺泡灌洗液细胞计数及分类 处死动物后，分离左肺并进行灌洗，每次注入生理盐水3 ml，连续灌洗3次，每次冲洗后将液体吸出。取灌洗液离心，于细胞计数板观察细胞分类并计数各类白细胞数量。
1.4.3 肺组织病理变化 处死动物后，迅速取新鲜左肺1 cm×1 cm×1 cm大小组织块，置于中性甲醛固定3 d，常规石蜡包块并切片，进行HE染色，光镜下观察各组大鼠的肺组织改变情况。
1.5 统计学处理 通过SPSS 13.0统计软件，进行单因素方差分析，组间差异比较采用q检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 支气管肺泡灌洗液细胞计数及分类
哮喘组大鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数、嗜酸粒细胞均显著高于正常组(P<0.05)；与哮喘组比较，实验组大鼠气管肺泡灌洗液中白细胞总数、嗜酸粒细胞均显著升高(P<0.05)。见表1。
2.2 各组大鼠呼吸功能情况
与对照组比较，哮喘组吸气阻力、呼气阻力显著增加，肺顺应性显著下降，说明哮喘大鼠肺功能较正常大鼠下降。与哮喘组比较，实验组大鼠吸气阻力、呼气阻力进一步增加，但是差异无统计学意义(P>0.05)；与哮喘组比较，实验组大鼠肺顺应性显著下降，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)，表明实验组大鼠肺功能较哮喘组进一步下降，见表2。
2.3 各组大鼠肺部组织改变
HE染色结果显示，正常组大鼠支气管管腔壁光滑、壁薄，上皮细胞正常，肺泡结构正常，未
作者单位：262608山东省临朐县九山中心卫生院
见大量白细胞浸润。哮喘组大鼠支气管管壁显著增厚，上皮细胞排列紊乱，间质增生明显，支气管周围大量白细胞浸润，肺泡失去正常形态。实验组大鼠支气管壁上皮细胞较哮喘组排列更加紊乱，部分结构破坏，白细胞浸润较哮喘组更加显著，肺泡失去正常形态。见图1,2,3。
3 讨论
支气管哮喘是一种常见的慢性呼吸道疾病，近年发病率逐年增加[1, 2]。患者支气管及肺泡存在显著的炎症反应，肺部大量炎症细胞浸润，支气管壁增生，肺泡正常结构破坏，患者呼吸功能显著下降，常伴有呼吸困难发生。本实验哮喘组大鼠肺部炎症明显，肺组织结构显著破坏，呼吸功能下降，说明模型制备成功。
临床上支气管哮喘患者病情呈急性发作与慢性迁延反复交替出现，患者往往会反复经历咳嗽、呼吸困难、治疗费用高昂导致经济压力、治疗失败导致绝望感等，这些都会对患者产生反复的心理应激[3]，而慢性的心理应激往往会影响机体的免疫内分泌等功能从而对疾病产生影响。临床上有报道称伴有抑郁的支气管哮喘患者比不伴有抑郁者病情重[4]，而关于哮喘伴发抑郁的原因报道不一，有的认为是哮喘病程中患者反复经历的心理应激导致抑郁，抑郁再反过来加重哮喘，从而形成恶性循环；而有人认为伴发抑郁与上述心理应激无关。
为探索慢性心理应激对支气管哮喘的影响，我们对部分支气管大鼠予以了多种轻度慢性不可预见性应激，并检测了经过应激后大鼠哮喘病情的改变。结果显示，与哮喘组比较，实验组大鼠气管肺泡灌洗液中白细胞总数、嗜酸粒细胞均显著升高，说明经历应激后大鼠肺部炎症加重。肺功能检测显示，与哮喘组比较，实验组大鼠肺顺应性显著下降，表明实验组大鼠肺功能较哮喘组进一步下降。同时肺组织HE染色显示哮喘组大鼠支气管管壁显著增厚，上皮细胞排列紊乱，间质增生明显，支气管周围大量白细胞浸润，肺泡失去正常形态。实验组大鼠支气管壁上皮细胞较哮喘组排列更加紊乱，部分结构破坏，白细胞浸润较哮喘组更加显著，肺泡失去正常形态，说明经历慢性应激的哮喘大鼠肺组织破坏更加显著。
综上所述，慢性心理应激可以加重哮喘大鼠的病情。故临床上为避免哮喘患者治疗失败、呼吸困难等心理应激导致的心理应激对哮喘病情的影响，治疗过程中，及时的做心理疏导、排除心理应激对患者的康复中有重要意义 ......
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