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编号:12251923
直接ELISA法与间接ELISA法检测HIV抗体的对比分析
http://www.100md.com 2012年7月25日 乔健健


第1页

    参见附件。

     【摘要】 目的 合理选择检测试剂,建立一种准确的ELISA检测方法。 方法 直接ELISA法和间接ELISA法对不同血液标本分别进行HIV抗体的检测,并对结果进行比较分析。 结果 间接ELISA法检测后会出现不同例数的假阳性结果,而直接ELISA法未出现假阳性结果。结论 直接ELISA法检测结果假阳性率低,作为新一代试剂,可逐步取代间接ELISA法。

    【关键词】 酶联接免疫吸附剂测定法;直接ELISA法;间接ELISA法;HIV;检测

    检测人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)抗体的常用实验方法有蛋白印迹法、酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, ELISA)法、胶体金法等。ELISA法的操作步骤简便,试剂成本较低,检测灵敏度较高,尤其适合于标本的快速批量检测,因而我国血站、卫生防疫部门更常使用ELISA法进行血液筛查和检测[1]。ELISA法有直接检测法和间接法,间接ELISA法会造成较大的假阳性检测结果,浪费原本紧张的临床血液资源,打击了一部分献血者的参与积极性,甚至会出现不良社会影响和纠纷[2]。为了合理选择检测试剂,建立一种准确的ELISA检测方法,本文采用直接ELISA法和间接ELISA法分别进行HIV抗体的检测,并对结果进行比较分析,现报告如下。

    1 资料与方法

    1.1 标本来源

    随机选取本中心接收的血液标本314例,采用间接ELISA法检测结果HIV阳性8例的血液标本,经过上级确认实验室确认的HIV阳性3例的血液标本。

    1.2 仪器

    ETI-MAX3000型全自动酶免分析仪。

    1.3 试剂

    检测所用的质控血清为卫生部临床检验中心提供。间接ELISA法试剂盒分别购自国内公司 (A)与公司 (B)。直接ELISA法为双抗原夹心法,所用国产试剂盒购自国内某公司(C),进口试剂盒购自日本某公司(D)。所有试剂均在有效期内使用,严格按照说明书规定的操作步骤进行。

    1.4 检测方法

    将血液样品离心后,通过自动加样器加样,在全自动酶联免疫分析系统中进行两次免疫初筛。对于初筛阳性血液标本采用双孔平行检测法再次检测。采用GeneLab试剂将ELISA法初筛结果阳性的血液标本进行免疫学蛋白印迹法确证实验。

    2 结果

    间接ELISA法和直接ELISA法检测HIV抗体的阳性结果比较见表1。可见,间接ELISA法检测后会出现不同例数的假阳性结果,而直接ELISA法未出现假阳性结果。

    3 讨论

    ELISA法是进行HIV感染情况的最常用初筛方法。间接ELISA法采用非特异性的抗人IgG作为酶标二抗,只可检测IgG抗体,对在微孔板上吸附的抗体无筛查功能,因而间接ELISA法特异性较低。影响间接ELISA法特异性的因素较多,但大比例的是由非特异性因素造成的。这是由于HIV抗原和其他逆转录病毒抗原存在交叉反应,而一些人血清中的HIV抗体和HIV感染的淋巴细胞抗原也存在交叉反应,所以会出现一定比例的假阳性结果[3]。直接ELISA法的采用固相抗原的抗-HIV抗原作为酶标,固相抗原和抗-HIV抗原可对血清中的HIV抗体进行双重识别[4],因此,直接EL ISA法特异性较高,其检测HIV抗体的假阳性结果比间接ELISA法降低。

    可用于ELISA法检测的试剂盒较多,国产试剂盒价格较低、灵敏度较高,而进口试剂盒价格较昂贵、特异性强、稳定性高[5]。目前国内ELISA法检测试剂盒没有采用统一的质量标准,因而国产间接法试剂盒的检测结果出现不同例数的阳性结果。在国产和进口直接ELISA法试剂盒的对比中,二者的检测结果无差异,均和确证实验结果一致。因此,使用国产双抗原直接ELISA法试剂盒来进行血液的HIV筛查工作,成本较低,而特异性、灵敏度均符合要求。

    参 考 文 献

    [1] 殷勤,盛磊. 不同孵育方式对ELISA法抗-HIV(1+2)检测结果的影响 ......

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