香菇多糖对原发性肝癌TACE前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的影响(2)
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参见附件。
12TACE 采用局麻下常规Seldinger技术，经皮股动脉穿刺插管至肝固有动脉或其分支后造影，选择导管至肿瘤供血动脉，先灌注羟基喜树碱20～40 mg，氟尿嘧啶l000 mg、顺铂40～80 mg、表柔比星加20～40 mg加超液化碘油5～20 ml，充分混匀乳剂缓慢注人。碘化油至瘤灶沉积浓密完整或血流变缓慢，直到出现血管铸型为止，少数患者加用明胶海绵栓塞。每4～6周为1个周期。
13主要试剂和仪器试剂CD25FITC，CD25APC，CD4PerCP5，CD4FITC，以及相应的同型对照抗体均购自美国BD公司；破膜固定液及破膜缓冲液，购自美国BD Biosciences公司；采用美国BD流式细胞仪检测。
14流式细胞仪检测CD4+CD25+Tregs 患者均清晨空腹,采集肝素抗凝抗凝静脉血5 ml，使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)，调整细胞浓度为2×107/ml，取100ul细胞悬液加入荧光标记抗体(FITC标记鼠抗人CD25单克隆抗体20ul、PECy5标记鼠抗人CD4。用流式细胞术(FACS)检测CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞数。CD4+CD25+ T细胞即为CD4+CD25+Treg：CD4+CD25+Treg频率= CD4+CD25+Treg细胞数÷CD4+T细胞数×100%。
15统计学方法实验数据应用SPSS 160统计软件分析，各组检测结果以均数±标准差(x±s)表示，组间差别采用t检验进行统计学差异性分析，以P<005为差异有统计学意义。
2结果
两组外周血CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率：治疗组在TACE前为(1059±434)%、TACE后4周(672±260)%;对照组在TACE前为(1021±442)%、TACE后4周为(856±312)%。在TACE前两组间差异无统计学意义(P>005);TACE术后4周时治疗组较对照组低,两组间差异有统计学意义(P<005)。见表1
表1外周血CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的百分率(%，x±s)
组别时间例数CD4+CD25+CD4+CD4+CD25+/CD4+治疗组TACE前2421±13209±441059±434TACE后4周2424±16282±48672±260对照组TACE前2222±14212±421021±442TACE后4周2228±17273±47856±312注：治疗组与对照组相比，P<005
3讨论
原发性肝癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，全球每年发生52万例，其中42%在中国[4]。TACE是非手术原发性肝癌的治疗的一种重要治疗手段之一，但化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时也杀伤机体正常增殖和分化的细胞，包括免疫细胞。Mofikawa等[5]认为肿瘤的治疗过程中杀伤肿瘤细胞与保护机体的免疫功能具有同等重要作用。免疫治疗辅助化疗的免疫化疗方法已成为肿瘤综合治疗的重要组成部分，TACE的同时配合免疫治疗，尽快恢复机体的免疫功能，提高机体特异性抗肿瘤免疫应答；抑制残存病灶的增殖和转移，在原发性肝癌患者的治疗中有着重要的意义。
目前，具有提高免疫功能的药物很多，香菇多糖是从香菇的实体中分离出来的多糖，是一种新型的兼有抑制肿瘤和提高免疫功能的可用做免疫治疗的多糖类生物反应调节剂。香菇多糖无直接的细胞毒作用，主要是通过宿主增强诱导活化的巨噬细胞及杀伤T 细胞，提高NK 细胞活性和增强抗体依赖性巨噬细胞毒作用来发挥抗肿瘤作用[6]。对实体瘤有抑制作用，可提高宿主免疫力，抑制肿瘤的生长[7]。
香菇多糖+TACE联合治疗对原发性肝癌患者肝脏肿瘤缩小，AFP降低，明显优于单用TACE治疗，TACE与香菇多糖联合使用，香菇多糖具有增加原发性肝癌患者的机体免疫功能，增加机体对肝癌细胞生长的抑制或/和对肿瘤抗原的识别能力[8]。
CD4+CD25+T细胞是一组源于胸腺淋巴细胞，能主动抑制自身反应性T细胞，与肿瘤免疫存在密切联系。肿瘤发生的机制之一,可能是通过CD4+CD25+T细胞增多，减少CD8+T细胞的增殖和功能，从而降低机体抗肿瘤的能力。而肿瘤细胞自身则具有免疫逃避能力，它可以刺激Treg细胞的增殖，减少CD8+T细胞的数目及功能，从而降低机体抗肿瘤能力[9]。原发性肝癌患者外周血CD4+CD25+T细胞在CD4+T细胞中所占比例明显增高，并且肿瘤的分期越晚，CD4+CD25+ T细胞的比例越高[10]。因此机体内的肿瘤细胞越多，Treg明显增高，CD4+CD25+ T细胞的比例越高。
本研究中，香菇多糖联合TACE组和单纯TACE组患者治疗后4周肝癌患者外周血CD4+CD25+T细胞在CD4+T细胞中所占比例较TACE前都有所降低分别为(672±260)%和 (856±312)% ......
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