支原体肺炎早期诊断中荧光定量PCR优于血清学试验
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【摘要】 目的 探讨荧光定量PCR在早期肺炎支原体肺炎(Mpp)中的诊断价值。方法 2009年3月至2011年9月收治入院诊断为社区获得性肺炎患者，分别在入院第1、8、15天用荧光定量PCR及血清学方法检测肺炎支原体(Mp)。结果 ①226例社区获得性肺炎中肺炎支原体感染47例，检出率为20.8%。②入院第1天，荧光定量PCR诊断支原体肺炎41例，高于Mp—IgM诊断26例，差异有统计学意义(χ2=8.516，P<0.05)。③Mp感染年龄段主要在18～35岁。④与普通CAP相比Mp肺炎临床表现无特异性。结论 ①Mp是CAP主要的病原体之一。②Mp感染1周内，荧光定量PCR检测优于血清学试验。
【关键词】 支原体肺炎；荧光定量PCR；支原体抗体；早期诊断
近年来肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，Mp)引起的呼吸系统感染不断增多，Mp已成为社区获得性肺炎(community acquired pneumonia，CAP)的主要致病菌之一。在中国城市成人CAP中，Mp肺炎占20.7%，已超越肺炎链球菌，成为最常见的病原体，部分城市甚至达到26.6%[1，2]。然而，目前检测Mp感染的主要实验室指标Mp—IgM，一般在发病1周左右才能被检出，导致早期Mp感染的漏诊误诊，极大的限制了早期临床运用价值。荧光定量PCR技术具有传统PCR灵敏度高，特异性强，检测时间短等优势，还可对扩增产物精确定量。本研究运用荧光定量PCR及血清Mp—IgM方法同时检测226例CAP患者中肺炎支原体感染情况，观察并比较两种方法在Mp感染早期的检出率。
1 资料与方法
1.1 一般资料 均来自2009年3月至2011年9月在四川省三台县人民医院内科收治的CAP患者，其诊断符合2006年《社区获得性肺炎诊治指南》[3]诊断标准，纳入者均为起病1周以内就医的患者。研究对象共计226例，其中男107例，女119例，年龄在18～74岁，平均(43±15)岁。对所有受试者采取的医疗措施均争得受试者知情同意。
1.2 标本采集 对所有患者分别在入院后第1天、第8天及第15天抽取患者血标本常规送检，用微型颗粒凝集法(日本富士Serodla—macoⅡ颗粒凝集试剂盒)检测血清Mp—IgM抗体。操作过程按说明书进行。
同时分别在这三个不同时间点收集患者的咽试纸，拭取患者咽后壁分泌物，用2 mmol/L NaOH处理标本后按照肺炎支原体核酸扩增荧光检测试剂盒说明书(上海申友生物技术有限责任公司提供)进行操作，操作过程按说明书进行。
1.3 诊断标准 用微型颗粒凝集试验检测血清Mp—IgM抗体滴度≥1：80为阳性，考虑为Mp感染。Mp—DNA拷贝数≥1×103copy/ml为阳性，考虑为Mp感染。
1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，实验数据用x±s表示，检出率的比较用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 CAP患者中Mp感染的检出率比较 以Mp—IgM抗体≥1∶ 80或Mp—DNA拷贝数≥1×103copy/ml为Mp感染的诊断标准。226例CAP患者中Mp感染人数为47例，总阳性率为20.8%。其中43例Mp—IgM抗体阳性，45例Mp—DNA阳性，Mp—IgM抗体及Mp—DNA均出现阳性者41例。2例患者Mp—IgM抗体阳性而Mp—DNA阴性，4例Mp—DNA阳性而抗体阴性。两种方法最终阳性检出率比较，差异无统计学意义(χ2=0.094，P=0.759)。见表1。
3 讨论
社区获得性肺炎中，Mp是临床常见的病原菌之一。在中国Mp更是超过肺炎链球菌成为我国最常见的致病菌[1]。然后Mp肺炎缺乏特异性临床表现，而Mp培养困难，耗时长，阳性率低，很难真正运用于实验室诊断。荧光定量PCR以标记特异性荧光探针为特点，减少了扩增产物污染的机会，提高了检测特异性，并可对扩增产物进行精确定量。
本研究结果显示，226例CAP患者中检测出Mp感染者47例，总检出率为20.8%，接近于全国平均水平。目前肺炎支原体感染在病原体感染中的地位正逐渐受到重视，研究表明上海等部分沿海城市Mp感染更是达到26.6%，高于全国平均水平，部分患者存在混合感染[2]。而在一项包含泰国3家医院的CAP流行病学研究中显示，Mp感染达到36.7%，远远高出国内平均水平[4]。表明Mp感染已经到了不容小视的地位，而且不同地区间Mp感染的差异较大，亚洲尤其是东南亚国家和地区是肺炎支原体感染的高发区[4]。
用血清学及荧光定量PCR两种方法检测入院3周内Mp检出情况，结果表明在感染早期，荧光定量PCR诊断价值更大。但两种方法检测出的最终阳性率相似。在第15天，有2例患者Mp—IgM抗体阳性而Mp—DNA拷贝数阴性，原因可能是部分标本采样时量较少所致[2，5]。有4例患者出现Mp—DNA拷贝数阳性而Mp—IgM阴性，该4例患者年龄均在40岁以上，3例有基础慢性阻塞性肺疾病史。出现DNA拷贝阳性而抗体阴性原因可能与患者免疫低下功能有关 ......
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