STAT1mRNA在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义(1)
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【摘要】 目的 检测信号转导子和转录激活子1(STAT1)在鼻咽癌中的表达，探讨其在鼻咽癌发生过程中的作用及其临床意义。方法 采用SYBR GreenI 荧光定量RT—PCR 技术对48例鼻咽癌组织和12例慢性鼻咽炎组织中STAT1 mRNA 的表达进行检测，并分析其表达情况与临床病理资料的相关性。结果 鼻咽癌癌组织中STAT1 mRNA 的表达水平明显高于慢性鼻咽炎组织(P<0.05)；在肿瘤TNM分期中，T3+T4 期癌组织STAT1 mRNA 表达水平明显高于T1+T2 期(P<0.05)；在临床分期中，Ⅲ+Ⅳ期癌组织STAT1 mRNA 表达水平明显高于Ⅰ+Ⅱ期(P<0.05)；而其表达与有无淋巴结转移无明显相关(P>0.05)。结论 STAT1 mRNA在鼻咽癌组织中高表达，其表达增强可能与鼻咽癌的发生和发展相关，可作为鼻咽癌恶性潜能的检测指标之一。
【关键词】 鼻咽癌；STAT1；荧光定量PCR
鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma， NPC)是我国南方和东南亚高发的上皮性恶性肿瘤，其治疗是以放疗为主的综合治疗，5年生存率一直徘徊在60%左右。鼻咽癌的发生发展是一个多阶段、多途径的过程，涉及多个基因的改变[1]。信号转导子和转录激活子1 (signaltransducer and activator of transcription 1， STAT1)作为第1个被发现的STATs家族成员， 与生长抑制有关， 可抑制肿瘤细胞增殖， 促进细胞凋亡，与多种肿瘤的发生、发展密切相关。在人类乳腺癌、黑素瘤、白血病、淋巴瘤和大肠癌等多种肿瘤中，可检测到STAT1 的异常表达[2—4]。本研究采用荧光定量RT—PCR 检测STAT1 mRNA 的表达水平，以探讨其在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源 48例鼻咽癌组织取自我院2010年12月至2011年11月门诊就诊的鼻咽癌患者，所有标本均经病理确诊为低分化鳞癌。另取同期门诊经病理检查证实为慢性鼻咽炎组织12例作为正常对照。48例鼻咽癌患者中，男32例，女16例，年龄24～78岁，平均43岁。按2010年UICC制定的TNM分期标准，T1期和T2期25例，T3期和T4期23例；临床Ⅰ期和临床Ⅱ期19例，临床Ⅲ期和临床Ⅳ期29例；无淋巴结转移者18例，有淋巴结转移者30例。所有患者活检前均未接受放疗及化疗和生物治疗，一次取材约200 mg组织立即放入液氮中储存备用，其余组织送常规病理检查以明确诊断。所有患者均具有完整的临床及病理资料。
1.2 材料和试剂 TRIzol试剂、DNase I(RNase free)、逆转录试剂盒及荧光定量PCR试剂盒购自TaKaRa公司，荧光定量PCR仪为Stratagene公司产品。
1.3 引物设计和合成 STAT1的上游引物序列为：5—GCTTCTTGGTCCTAACGC—3，下游引物序列为5—TCTCGCTCCTTGCTGATG—3，扩增长度为215bp；内参照ACTB(β—actin)的上游引物序列为：5—CACCCAGCACAATGAAGAT—3，下游引物序列为：5—CAAATAAAGCCATGCCAAT—3，扩增长度为255bp；上述引物均由上海Invitrogen 公司合成。
1.4 荧光定量RT—PCR检测目的基因
1.4.1 组织总RNA提取 Trizol一步法从组织匀浆中提取总RNA，紫外分光光度仪测定总RNA的纯度和浓度，在1%的琼脂糖凝胶中电泳检测RNA质量，并去除RNA中的痕量gDNA。
1.4.2 逆转录反应 参照逆转录试剂盒说明书加样并进行反应，每份组织取5 μg 总RNA 进行逆转录，反应体系为20 μL；反应条件：37℃ 15 min，85℃ 5 s。
1.4.3 荧光定量PCR检测 取cDNA为模板，采用25 μL反应体系，包括12.5 μL SYBR Premix Ex Taq，上下游引物各0.5 μL 10pmol/L， ROX Reference Dye II 0.5 μL，cDNA 1 μL，双蒸水10 μL。反应条件为：预变性95℃，15 s；再进行40个循环(95℃变性5 s，48～57℃退火20 s，72℃延伸20 s)；PCR结束后，经计算机的自动分析采集数据。本实验采用相对定量的比较Ct法，以目的基因的Ct值减去内参的Ct值即△Ct，表示STAT1的mRNA 相对于ACTB的表达量，△Ct值越大，表示基因的表达量越小，反之，表达量越大[5]。
1.5 统计学方法 每组实验重复3 次，计量资料以x±s 表示，采用SPSS 17 ......
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