几种结核分支杆菌培养方法的应用分析
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参见附件。
结核病是一种较严重的传染病，高耐药性结核病的疫情呈上升趋，已经成为结核病诊断和治疗的难点。结核分枝杆菌培养在结核病的诊断和治疗中起着重要作用。目前公认的结核分支杆菌培养方法有两种，即液体培养基快速检测法、罗氏固体培养法。液体培养法特点是结果报告时间短。缺点是价格昂贵，需特殊仪器。罗氏固体培养法是我国普及通用的方法，但缺点是时间长。针对二方法的优缺点我们研究出结核分支杆菌固液双向培养基，本文对三种培养方法进行对比分析。
1 材料和方法
1.1 2010年1月至2011年8月期间我院收治的结核病患者或疑似结核病患者共927份痰标本。
1.2 酸性罗氏培养法操作、培养基的制备及结果判定，按《结核病诊断细菌学检验规程》进行。 BACTEC MGIT960全自动分枝杆菌检测系统按操作指南完成。结核分支杆菌固液双向培养基培养前处理操作步骤同酸性罗氏培养法法。
1.3 结核分支杆菌固液双向培养基的制备：称取7H9干粉培养基4.7 g，蒸馏水溶解后加入4 ml甘油，蒸馏水补足至900 ml，进行分装，高压灭菌，置4℃冰箱备用。使用前加入营养增强剂(OADC)、抑菌剂(终浓度为50 μg/ml羟苄青霉素、10 μg/ml两性霉素B)。以中性罗氏培养基为基础，加入7H9液相培养基4 ml(约占斜面的一半)。
2 结果
2.1 三种培养方法的阳性率、污染率的比较，结果见表1。三种方法培养阳性率无显著性差异(P<0.05)；污染率情况，双相培养基法(4.5%)高于液体培养法(4.1%)高于固体培养法(2.2%)。
2.2 三种培养方法培养阳性报告时间的比较，结果见表2。
结核分支杆菌在BACTEC MGIT960法平均生长时间11.2 d，固液双相培养基平均生长时间14.4 d， 改良罗氏培养20.5 d。
2.3 三种培养方法培养及药敏成本的对比(药敏按四种药物计算)改良罗氏培养基的培养药敏的成本为76元，固液双相培养基的培养药敏的成本为80元，液体培养基的培养药敏的成本为360元。应用液体培养基进行结核菌培养药敏所需的成本远远高于固液双相培养基与改良罗氏培养基的价格。
3 讨论
本文应用酸性罗氏培养法、BACTEC MGIT960法、固液双相培养基法分别对927份痰标本进行培养，培养阳性率分别为37.5%、43.0%、38.3%，无显著性差异(P<0.05)；污染率分别为2.2%、4.1%、4.5%。
酸性罗氏培养基的主要是以鸡蛋为营养成分，培养前处理方法为碱处理直接接种在培养基上，达到适合结核杆菌生长的pH7.2左右，，至少需2～3 d的缓冲，分枝杆菌不能有效地吸收营养成分而导致细菌对数生长期延滞，这是固体培养基上生长缓慢的主要原因。而液体培养基、固液双相培养基的液相pH为6.5～6.7，接种氢氧化钠与痰的混合液后，使pH直接改变至7.0～7.2。使细菌细胞在液相培养基内，可使细菌浸泡在营养成分中以利于新陈代谢对数生长期提前。因此液体培养基、固液双相培养基培养阳性的报告时间比固体培养基培养阳性的报告时间大大缩短。
固液双相培养基的酸碱度调节为pH6.5～6.7，痰标本经碱处理后不中和、不离心直接接种，操作步骤十分简便，固相培养基可直视观察结核杆菌的菌落生长情况，易于挑取菌落，有利于药敏实验菌悬液的定量制作。液相培养基起到缓冲酸碱度、提高营养以利于新陈代谢对数生长期提前的作用 ......
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