异种抗原免疫及瘤内注射诱导淋巴细胞杀伤S180细胞的研究
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【摘要】 目的 研究异种抗原免疫及瘤内注射激活的脾淋巴细胞对小鼠肉瘤S180细胞的体外杀伤活性。方法 分别用两种异种抗原(灭活链球菌和A型血型抗原)进行试验。将异种抗原腹腔注射全身免疫小鼠，接种S180细胞于小鼠背部，成瘤后，于瘤内注射异种抗原，并设异种抗原仅全身免疫组、异种抗原仅瘤内注射组和空白对照组。用MTT比色法测定小鼠脾淋巴细胞对S180细胞的杀伤率。结果 在效靶比20：1时，灭活链球菌全身免疫及瘤内注射组脾淋巴细胞对S180细胞的杀伤率为63.17%±3.94%，显著高于灭活链球菌仅全身免疫组、灭活链球菌仅瘤内注射组和空白对照组(杀伤率分别为10.26%±1.95%、33.30%±3.82%和9.85%±2.76%)，P值均<0.05。同时A型血型抗原全身免疫及瘤内注射组脾淋巴细胞对S180细胞的杀伤率为76.27%±4.07%，显著高于A型血型抗原仅全身免疫组、A型血型抗原仅瘤内注射组和空白对照组(杀伤率分别为10.55%±2.29%、40.92%±4.98%和9.85%±2.76%)，P值均<0.05。另外A型血型抗原全身免疫及瘤内注射组的杀伤率高于灭活链球菌全身免疫及瘤内注射组，A型血型抗原仅瘤内注射组的杀伤率也高于灭活链球菌仅瘤内注射组，P值均<0.05。结论 异种抗原免疫及瘤内注射后小鼠的免疫功能有所提高，激活的脾淋巴细胞对S180细胞有很强的杀伤活性。
【关键词】 淋巴细胞；杀伤活性；免疫；肿瘤
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂 胎牛血清、RPMI1640培养液、PBS、小鼠红细胞裂解液及MTT试剂盒均购自普利莱基因技术有限公司。灭活链球菌粉剂(α-溶血性链球菌经60Co 机照射24 h灭活)及人A型血型抗原由南方医科大学珠江医院肿瘤中心实验室提取。利用血型抗原免疫及瘤内注射来治疗肿瘤的实验方法已申请专利，专利号为200810029547.9。
1.1.2 实验动物及肿瘤细胞株 试验用动物为4～6周龄昆明种小鼠，体重18～20 g，雌雄兼用，购自南方医科大学动物实验中心。小鼠肉瘤S180细胞株由南方医科大学药学院惠赠。
1.2 方法
1.2.1 试验动物分组：昆明小鼠42只，每组6只，随机分为7组：①灭活链球菌全身免疫及瘤内注射组。②灭活链球菌仅全身免疫组。③灭活链球菌仅瘤内注射组；①A型血型抗原全身免疫及瘤内注射组。②A型血型抗原仅全身免疫组。③A型血型抗原仅瘤内注射组。④空白对照组。
1.2.2 小鼠实体瘤制作方法 先制作S180腹水型小鼠，再从小鼠腹腔无菌抽取癌腹水，制成癌细胞悬液，调整细胞浓度为1×107个/ml，取0.1 ml用于小鼠背部皮下接种以制作实体瘤模型，成瘤率近100%[3]。
1.2.3 造模过程 前两周用异种抗原全身免疫小鼠4次，2次/周(A、B组小鼠腹腔注射浓度为0.1 g/ml的灭活链球菌0.1 ml/只；a、b组小鼠腹腔注射浓度为5 mg/ml的A型血型抗原0.1 ml/只；同时C、c、D(d)组小鼠均腹腔注射生理盐水0.1 ml/只)。然后于7组小鼠背部皮下接种浓度为1×107个/ml 的S180细胞0 ......
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