川芎嗪对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路的影响(2)
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1 材料与方法
1. 1 实验材料 雄性SD大鼠24只， 清洁级， 体重(200±20)g， 购自山西医科大学动物中心， 普通饲料喂养， 自由进水。四氯化碳(CCl4)为中邦化工分析纯；产色基质偶氮法鲎试剂盒购自厦门市鲎试剂实验厂有限公司；谷胱甘肽-S转移酶(GST)、丙二醛(MDA)TBA法试盒购自南京建成生物工程研究所；羟脯氨酸(hydroxyproline， HYP )标准品、天狼猩红、固绿FCF购自Sigma公司；盐酸川芎嗪注射液(郑州卓峰制药有限公司) ；兔抗NFE2抗体购自武汉博士德；小鼠抗β-actin、山羊抗小鼠IgG/HRP、山羊抗兔IgG/HRP抗体购自北京中杉金桥。
1. 2 动物分组及处理 将健康清洁级SD大鼠适应性喂养1周后， 随机分为三组， A组(正常对照组)、B组(肝纤维化模型组)、C组(川芎嗪治疗组)。A组不给予特殊处理， B、C组首次给予5 ml/kg体重CCl4分析纯皮下注射， 然后按3 ml/kg体重皮下注射40% CCl4植物油(V/V)混合液， 每周2次， C组于造模同时给予腹腔注射60 mg/kg盐酸川芎嗪注射液， 每周6次。6周后， 在乙醚麻醉无菌无热源条件下， 腹主动脉采血取血浆测定血浆内毒素水平；取肝左叶一部分于4%多聚甲醛中固定， 24 h后流水冲洗、脱水、石蜡包埋， 行肝组织形态学检测， 其余部分于-86℃ 保存用于下述指标检测。
1. 3 指标检测及分析 石蜡包埋组织切片， 天狼猩红胶原染色及常规HE染色。JD-801形态学图像采集分析系统观察分析， 计算肝组织的FI (纤维化指数， FI=纤维染色区面积/整个视野面积×100%)；肝组织HYP含量测定参照本实验室以往改良的氯胺T法[2]；血浆内毒素及肝组织MDA、GST含量测定依照试剂盒说明书操作；Western-blotting检测肝组织中Nrf2的表达量 ......
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