妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘滋养细胞中TNF—α mRNA的表达及其与胆汁酸水平变化的关系
【摘要】 目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)在妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)发病机制中的作用。方法 66例剖宫产术分娩的妊娠期肝内胆汁淤积症产妇作为A组， 随机抽取同期行单纯剖宫产术的70例健康产妇作为B组。对A、B两组临床资料进行对比分析。结果 A组与B组相比， 新鲜的胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平分别为(2.24±0.27)和(1.10±0.09)；两组比较差异有统计学意义(P<0.01)；培养并处理后胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平分别为(3.97±0.35)和(1.07±0.12)；两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TNF-α与妊娠期肝内胆汁淤积症发生关系密切， 应引起临床治疗的注意。
【关键词】 肿瘤坏死因子α；妊娠期肝内胆汁淤积症；TNF-α mRNA
妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是妊娠期比较常见的一种并发症， 主要表现为血清胆汁酸水平升高和肝脏酶学指标异常。妊娠期肝内胆汁淤积症严重危害胎儿， 早产、胎儿窘迫、胎死宫内的发生率很高。胎盘是胎儿和母体直接接触的界面， 胎盘滋养细胞的变化是直接影响胎儿的。目前， 胆汁酸直接形成的危害是研究的重点， 为防治胎儿不良反应的发生， 揭示妊娠期肝内胆汁淤积症的发病机制， 具有重要的临床意义。本研究通过检测妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘滋养细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平来探讨TNF-α在妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制中的作用。
, 百拇医药
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院2011年7月～2013年7月收治的剖宫产术分娩产妇136例， 孕周为37～40周。66例妊娠期肝内胆汁淤积症产妇作为A组， 妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)诊断标准如下：①妊娠期出现无法解释的皮肤瘙痒， 排除皮肤疾病；②血清胆红素约在1.1～5.0 mg/dl， 血清SGPT或SGOT约60～100 U， 更高者少见；③排除肝脏疾病、胆道疾病、需用抗生素的感染。随机抽取同期行单纯剖宫产术的70例健康产妇为B组， 比较两组间术中出血量、术后24 h血红蛋白下降、术后排气时间、产后病率、手术时间以及手术后住院时间的情况。两组患者年龄、孕周、产次差异无统计学意义(P>0.05)， 具有可比性。
1. 2 方法 在胎盘娩出后无菌条件下进行取材， 置于DMEM培养液中送细胞培养室， 并制备新鲜的胎盘组织冰冻切片。先应用实时荧光定量PCR技术检测A、B两组新鲜的胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平；再对滋养细胞体外培养72 h后， A组滋养细胞加入胆酸混合物， B组滋养细胞加入等体积的乙醇， 6 h后应用实时荧光定量PCR技术检测两组滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平。
, 百拇医药
1. 3 统计学方法 本研究所得数据通过SPSS13.0统计学软件进行分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 A组与B组新鲜的胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平分别为(2.24±0.27)和(1.10±0.09)；两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
2. 2 A组与B组培养并处理后胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平分别为(3.97±0.35)和(1.07±0.12)；两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
3 讨论
妊娠期肝内胆汁淤积症可导致早产、胎儿宫内窘迫增加围生儿死亡率， 发病机制及临床过程复杂， 母婴死亡率较高。本文对妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制进行探讨。妊娠时胎盘作为内分泌器官产生大量重要的细胞因子， 这些细胞因子进入母体及胎儿血液循环， 对代谢、免疫、血管等系统发挥多种作用。在整个妊娠期， 这些细胞因子进行着复杂的平衡调节， 维持了正常妊娠的过程。近年来研究表明， 细胞因子作为参与免疫反应的重要介质， 在妊娠期肝内胆汁淤积症的发生、发展过程中起重要的作用[1]。TNF-α主要是由单核-巨噬细胞分泌， 其他类型的细胞， 如淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞等在一定条件下也具有产生和释放TNF-α的能力， 妊娠期TNF-α主要由胎盘和脂肪组织合成和分泌。TNF-α是一种由单核巨噬细胞产生的细胞因子， 在妊娠期肝内胆汁淤积症的发生、发展过程中起重要的作用， 参与了滋养细胞的凋亡过程。TNF-α的主要生化作用有：直接杀伤细胞， 损坏肝细胞；刺激氧自由基产生， 导致肝细胞过氧化损伤；促进胎盘合成、分泌雌激素[2]。其主要通过受体发挥作用，参与多种生理与免疫过程。肿瘤坏死因子1受体(TNFR1)介导了TNF-α的主要生物学效应， TNFR1含死亡结构域， 可触发信号传导级联反应而导致细胞凋亡或通过激活核转录因子——核因子кB(NFкB)促使细胞增殖、分化[3]。子宫内膜和胎盘组织中存在大量的巨噬细胞， 适量的TNF-α参与胎儿与胎盘组织的生长、分化调节， 刺激滋养细胞合成和分泌孕酮及HCG， 防止母体对胎儿的排斥反应。有研究提示， TNF-α可以提高超氧离子水平及超氧离子激活NO的能力， 使血管内皮功能失调， 使胎盘滋养细胞发生凋亡。
, 百拇医药
本研究显示妊娠期肝内胆汁淤积症组滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平明显高于健康产妇组， 在高浓度胆酸的作用下， TNF-α水平明显升高， 导致胎盘滋养细胞凋亡的增加， 引起的胎盘功能障碍， 尽而出现胎儿发育迟缓、胎儿窘迫、早产、死胎等不良现象。结论与杜巧玲等[4]一致， 高胆汁酸环境导致胎盘组织TNF-α水平增高， 导致滋养细胞凋亡增加， 引起不良妊娠结局。说明TNF-α与妊娠期肝内胆汁淤积症关系相当密切， 抑制TNF-α的分泌或许会减轻对产妇和胎儿的危害， 对妊娠期肝内胆汁淤积症治疗达到新的切入点。
参考文献
[1]黎智彪.肝功能检测与妊娠期肝内胆汁淤积症的临床研究.当代医学， 2013(18)：43-44
[2]曹丽琼，曲广第，王冬梅.妊娠期肝内胆汁淤积症IL-10、TNF-α表达变化及其与肝功能变化的关系.免疫学杂志， 2012(5)：424-426.
[3]李晶媛，李树臣，杨维良.TNF-α诱导肝细胞凋亡机制的回顾与展望.世界华人消化杂志， 2007(6)：606-611.
[4]杜巧玲，段涛.妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘滋养细胞中TNF-α mRNA的表达及其与胆汁酸水平变化的关系.中华妇产科学杂志， 2013， 9(48)：687-688.
[收稿日期：2014-08-21], 百拇医药(黄娟)
【关键词】 肿瘤坏死因子α；妊娠期肝内胆汁淤积症；TNF-α mRNA
妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是妊娠期比较常见的一种并发症， 主要表现为血清胆汁酸水平升高和肝脏酶学指标异常。妊娠期肝内胆汁淤积症严重危害胎儿， 早产、胎儿窘迫、胎死宫内的发生率很高。胎盘是胎儿和母体直接接触的界面， 胎盘滋养细胞的变化是直接影响胎儿的。目前， 胆汁酸直接形成的危害是研究的重点， 为防治胎儿不良反应的发生， 揭示妊娠期肝内胆汁淤积症的发病机制， 具有重要的临床意义。本研究通过检测妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘滋养细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平来探讨TNF-α在妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制中的作用。
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1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院2011年7月～2013年7月收治的剖宫产术分娩产妇136例， 孕周为37～40周。66例妊娠期肝内胆汁淤积症产妇作为A组， 妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)诊断标准如下：①妊娠期出现无法解释的皮肤瘙痒， 排除皮肤疾病；②血清胆红素约在1.1～5.0 mg/dl， 血清SGPT或SGOT约60～100 U， 更高者少见；③排除肝脏疾病、胆道疾病、需用抗生素的感染。随机抽取同期行单纯剖宫产术的70例健康产妇为B组， 比较两组间术中出血量、术后24 h血红蛋白下降、术后排气时间、产后病率、手术时间以及手术后住院时间的情况。两组患者年龄、孕周、产次差异无统计学意义(P>0.05)， 具有可比性。
1. 2 方法 在胎盘娩出后无菌条件下进行取材， 置于DMEM培养液中送细胞培养室， 并制备新鲜的胎盘组织冰冻切片。先应用实时荧光定量PCR技术检测A、B两组新鲜的胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平；再对滋养细胞体外培养72 h后， A组滋养细胞加入胆酸混合物， B组滋养细胞加入等体积的乙醇， 6 h后应用实时荧光定量PCR技术检测两组滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平。
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1. 3 统计学方法 本研究所得数据通过SPSS13.0统计学软件进行分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 A组与B组新鲜的胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平分别为(2.24±0.27)和(1.10±0.09)；两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
2. 2 A组与B组培养并处理后胎盘组织滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平分别为(3.97±0.35)和(1.07±0.12)；两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。
3 讨论
妊娠期肝内胆汁淤积症可导致早产、胎儿宫内窘迫增加围生儿死亡率， 发病机制及临床过程复杂， 母婴死亡率较高。本文对妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制进行探讨。妊娠时胎盘作为内分泌器官产生大量重要的细胞因子， 这些细胞因子进入母体及胎儿血液循环， 对代谢、免疫、血管等系统发挥多种作用。在整个妊娠期， 这些细胞因子进行着复杂的平衡调节， 维持了正常妊娠的过程。近年来研究表明， 细胞因子作为参与免疫反应的重要介质， 在妊娠期肝内胆汁淤积症的发生、发展过程中起重要的作用[1]。TNF-α主要是由单核-巨噬细胞分泌， 其他类型的细胞， 如淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞等在一定条件下也具有产生和释放TNF-α的能力， 妊娠期TNF-α主要由胎盘和脂肪组织合成和分泌。TNF-α是一种由单核巨噬细胞产生的细胞因子， 在妊娠期肝内胆汁淤积症的发生、发展过程中起重要的作用， 参与了滋养细胞的凋亡过程。TNF-α的主要生化作用有：直接杀伤细胞， 损坏肝细胞；刺激氧自由基产生， 导致肝细胞过氧化损伤；促进胎盘合成、分泌雌激素[2]。其主要通过受体发挥作用，参与多种生理与免疫过程。肿瘤坏死因子1受体(TNFR1)介导了TNF-α的主要生物学效应， TNFR1含死亡结构域， 可触发信号传导级联反应而导致细胞凋亡或通过激活核转录因子——核因子кB(NFкB)促使细胞增殖、分化[3]。子宫内膜和胎盘组织中存在大量的巨噬细胞， 适量的TNF-α参与胎儿与胎盘组织的生长、分化调节， 刺激滋养细胞合成和分泌孕酮及HCG， 防止母体对胎儿的排斥反应。有研究提示， TNF-α可以提高超氧离子水平及超氧离子激活NO的能力， 使血管内皮功能失调， 使胎盘滋养细胞发生凋亡。
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本研究显示妊娠期肝内胆汁淤积症组滋养细胞中TNF-α mRNA的表达水平明显高于健康产妇组， 在高浓度胆酸的作用下， TNF-α水平明显升高， 导致胎盘滋养细胞凋亡的增加， 引起的胎盘功能障碍， 尽而出现胎儿发育迟缓、胎儿窘迫、早产、死胎等不良现象。结论与杜巧玲等[4]一致， 高胆汁酸环境导致胎盘组织TNF-α水平增高， 导致滋养细胞凋亡增加， 引起不良妊娠结局。说明TNF-α与妊娠期肝内胆汁淤积症关系相当密切， 抑制TNF-α的分泌或许会减轻对产妇和胎儿的危害， 对妊娠期肝内胆汁淤积症治疗达到新的切入点。
参考文献
[1]黎智彪.肝功能检测与妊娠期肝内胆汁淤积症的临床研究.当代医学， 2013(18)：43-44
[2]曹丽琼，曲广第，王冬梅.妊娠期肝内胆汁淤积症IL-10、TNF-α表达变化及其与肝功能变化的关系.免疫学杂志， 2012(5)：424-426.
[3]李晶媛，李树臣，杨维良.TNF-α诱导肝细胞凋亡机制的回顾与展望.世界华人消化杂志， 2007(6)：606-611.
[4]杜巧玲，段涛.妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘滋养细胞中TNF-α mRNA的表达及其与胆汁酸水平变化的关系.中华妇产科学杂志， 2013， 9(48)：687-688.
[收稿日期：2014-08-21], 百拇医药(黄娟)