慢病毒介导GFP转染小鼠ESC及其对干细胞特性的影响(2)
1. 3 慢病毒的包装 取9 μg的ViraPowerTM Lentiviral Packaging Mix和3 μg的ubiquitin C promoter-GFP载体加入到1 ml的Opti-MEM培养液中混匀。另取36 μl的Lipofectamine 2000加入到1 ml的Opti-MEM培养液中混匀， 室温放置5 min。混和DNA和Lipofectamine 2000的Opti-MEM培养液， 室温放置20 min后加入含5×106个293FT细胞的无G418的培养液中， 培养24 h后换液。转染72 h后收集含有病毒的培养液， 3000 rpm离心30 min， 0.45 μm滤膜过滤。1. 4 慢病毒转染ESC及阳性细胞克隆的筛选 将培养于6孔板2 d的ESC每孔加入病毒悬液0.5 ml， 培养12 h后换液。72 h后荧光显微镜下观察发光情况， 选择阳性克隆， 胰酶消化离心后以10个/cm2接种密度再次接种到明胶覆盖的培养皿中 ......
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