伽玛刀治疗对原发性肝癌患者外周血Th17淋巴细胞的影响(1)
【摘要】 目的 观察原发性肝癌患者伽玛刀治疗前后Th17细胞的变化。方法 43例接受伽玛刀治疗的原发性肝癌患者作为研究组；43例健康体检者作为正常对照组；采用流式细胞仪检测其外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、Th17细胞水平及CD4+/CD8+比值。结果 原发性肝癌患者CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值均显著低于对照组(P<0.05)；CD8+T细胞和Th17细胞分别高于对照组(P<0.05)；放疗后1个月， CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值均较治疗前上升， 而CD8+T细胞和Th17细胞比例下降， 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 原发性肝癌患者处于免疫抑制状态， 伽玛刀治疗可降低其外周血Th17细胞水平， 调节T细胞亚群平衡， 增强机体免疫功能。
【关键词】 肝肿瘤；伽玛刀；流式细胞术；T淋巴细胞亚群；Th17细胞
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.17.059
, 百拇医药
原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤， 致死率在所有恶性肿瘤中占第三位， 70%的患者就诊时为中晚期无手术机会， 且术后复发、转移率高。Th17细胞是一种新的CD4+T淋巴细胞亚群， 在多种肿瘤组织中高表达， 抑制细胞免疫， 使肿瘤细胞发生免疫逃逸， 促进肿瘤复发、转移[1]。体部伽玛刀是一种新型的立体定向三维适形放疗技术， 多项临床研究证实原发性肝癌伽玛刀治疗后局部控制率高， 并发症少[2]。临床上已观察到伽马刀治疗后， 肝癌患者免疫能力增强甚至使远处的转移灶缩小或消失， 但这种免疫增强的具体机制仍不清楚， 本研究通过检测肝癌患者伽玛刀治疗前后外周血Th17细胞数量及T淋巴细胞亚群的变化， 探讨伽玛刀对肝癌免疫功能的影响及可能机制。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取2013年1月～2014年6月在本院接受体部伽玛刀治疗的43例原发性肝癌患者为研究对象(研究组)， 所有患者均符合2001年第八届全国肝癌学术会议通过的原发性肝癌诊断标准， 临床诊断为原发性肝癌或行肝穿活检病理学明确诊断。其中男25例， 女18例；年龄27～65岁， 平均年龄(49.5±6.28)岁， 肝功能Child-Pugh分级A级31例， B级12例；甲胎蛋白(AFP) >20 μg/L者33例；有肝区疼痛者21例， 门静脉癌栓者11例， 少量腹水者9例。病例选择排除合并有影响机体免疫功能疾病的患者， 且未使用影响机体免疫功能的药物。同时选43例健康体检者作为正常对照组， 男28例， 女15例， 年龄25～60岁， 平均年龄(47.3±5.1)岁。
, 百拇医药
1. 2 治疗方法 采用OUR-QGD型三维立体定向伽玛射线体部治疗系统。治疗的总剂量及时间分割根据肿瘤大小、部位、全身状况、周围组织放射敏感性决定， 采用50%～70%等剂量曲线包绕靶区， 通过剂量-体积直方图进行评估， 靶区周边总剂量4000～6000 cGy， 单次剂量260～600 cGy， 分割10～18次， 每周照射3～5次。
1. 3 检测方法 伽玛刀治疗前1 d、放疗后1周、1个月分别抽空腹外周血送检， 采用流式细胞计数仪( XL/XL-MCL， 美国贝克曼公司)检测CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值、Th17/CD4+比值；放疗期间观察患者疼痛及胃肠道症状变化， 每周复查血常规、肝肾功能；治疗后4周行腹部增强CT、AFP检查， 评价疗效。
1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
, http://www.100md.com
2 结果
2. 1 T细胞亚群、Th17细胞免疫功能变化比较。见表1。
2. 2 临床疗效及并发症 治疗后4周行腹部增强CT检查， 肿瘤明显缩小者32例， 近期有效率74.4%；AFP均有不同程度下降， <20 μg/L者19例；21例肝区疼痛患者中， 完全消失13例， 减轻8例；11例门脉癌栓患者中， 4例癌栓消失。
治疗后， 13例出现了Ⅲ度骨髓抑制， 以白细胞、血小板下降为主， 予以细胞白介素(IL)-11、粒细胞集落刺激因子等治疗恢复正常；26例治疗后谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)一过性轻中度升高， 血清白蛋白下降， 予以保肝、补充人血白蛋白后1～2周恢复正常；17例出现低热、轻中度恶心、呕吐， 经抗炎、补液、保护胃黏膜及止吐等对症处理好转。
3 讨论
, 百拇医药
Th17细胞是近年来新发现的一种CD4+T细胞亚群， 来源于前体T淋巴细胞， 因分泌IL-17而被命名。IL-17则通过刺激肿瘤基质细胞及成纤维细胞， 使肿瘤微环境发生炎性反应， 促进一些血管源性因子(CXCL1、CXCL5、CXCL6等)高表达， 促肿瘤组织微血管形成[3]；IL-17还通过诱导IL-6生成， 激活致癌Stat3信号通路， 进一步促血管形成并促存活基因上调。另一方面， IL-17的高表达致肿瘤微环境中干扰素-γ(IFN-γ)生成减少， 而IFN-γ的下降必然会抑制Fas介导的细胞毒T淋巴细胞的毒效应机制， 使机体免疫监视功能下降， 肿瘤细胞发生免疫逃逸[4]。文献报道[5]肝癌组织中Th17细胞浸润数目升高， Ⅲ、Ⅳ期明显高于Ⅰ、Ⅱ期， IL-17蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常肝组织， 并随着肿瘤的浸润、转移呈升高趋势， 说明Th17细胞是肝癌的促效应细胞， 其数量的多少可作为判断肝细胞癌侵袭性、进展以及预后的一个潜在的重要指标。
CD4+T细胞介导的细胞免疫在机体抗肿瘤效应中起关键作用， 临床研究证实[6]， 原发性肝癌患者细胞免疫功能低下， 表现为外周血CD4+T细胞数量下降， CD4+/CD8+比值倒置， 外周血CD4+T淋巴细胞数量与AFP、肿块大小、临床分期和肿瘤恶性程度密切相关。本研究显示43例肝癌患者治疗前与健康体检者相比外周血CD3+T、CD4+T细胞数量及CD4+/CD8+比值下降， CD8+T细胞及Th17细胞数量增多， 存在T淋巴细胞亚群紊乱， 与临床报道一致[7]。, 百拇医药(侯继院 张松 刘兴安 单国用)
【关键词】 肝肿瘤；伽玛刀；流式细胞术；T淋巴细胞亚群；Th17细胞
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.17.059
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原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤， 致死率在所有恶性肿瘤中占第三位， 70%的患者就诊时为中晚期无手术机会， 且术后复发、转移率高。Th17细胞是一种新的CD4+T淋巴细胞亚群， 在多种肿瘤组织中高表达， 抑制细胞免疫， 使肿瘤细胞发生免疫逃逸， 促进肿瘤复发、转移[1]。体部伽玛刀是一种新型的立体定向三维适形放疗技术， 多项临床研究证实原发性肝癌伽玛刀治疗后局部控制率高， 并发症少[2]。临床上已观察到伽马刀治疗后， 肝癌患者免疫能力增强甚至使远处的转移灶缩小或消失， 但这种免疫增强的具体机制仍不清楚， 本研究通过检测肝癌患者伽玛刀治疗前后外周血Th17细胞数量及T淋巴细胞亚群的变化， 探讨伽玛刀对肝癌免疫功能的影响及可能机制。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取2013年1月～2014年6月在本院接受体部伽玛刀治疗的43例原发性肝癌患者为研究对象(研究组)， 所有患者均符合2001年第八届全国肝癌学术会议通过的原发性肝癌诊断标准， 临床诊断为原发性肝癌或行肝穿活检病理学明确诊断。其中男25例， 女18例；年龄27～65岁， 平均年龄(49.5±6.28)岁， 肝功能Child-Pugh分级A级31例， B级12例；甲胎蛋白(AFP) >20 μg/L者33例；有肝区疼痛者21例， 门静脉癌栓者11例， 少量腹水者9例。病例选择排除合并有影响机体免疫功能疾病的患者， 且未使用影响机体免疫功能的药物。同时选43例健康体检者作为正常对照组， 男28例， 女15例， 年龄25～60岁， 平均年龄(47.3±5.1)岁。
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1. 2 治疗方法 采用OUR-QGD型三维立体定向伽玛射线体部治疗系统。治疗的总剂量及时间分割根据肿瘤大小、部位、全身状况、周围组织放射敏感性决定， 采用50%～70%等剂量曲线包绕靶区， 通过剂量-体积直方图进行评估， 靶区周边总剂量4000～6000 cGy， 单次剂量260～600 cGy， 分割10～18次， 每周照射3～5次。
1. 3 检测方法 伽玛刀治疗前1 d、放疗后1周、1个月分别抽空腹外周血送检， 采用流式细胞计数仪( XL/XL-MCL， 美国贝克曼公司)检测CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值、Th17/CD4+比值；放疗期间观察患者疼痛及胃肠道症状变化， 每周复查血常规、肝肾功能；治疗后4周行腹部增强CT、AFP检查， 评价疗效。
1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料以率(%)表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
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2 结果
2. 1 T细胞亚群、Th17细胞免疫功能变化比较。见表1。
2. 2 临床疗效及并发症 治疗后4周行腹部增强CT检查， 肿瘤明显缩小者32例， 近期有效率74.4%；AFP均有不同程度下降， <20 μg/L者19例；21例肝区疼痛患者中， 完全消失13例， 减轻8例；11例门脉癌栓患者中， 4例癌栓消失。
治疗后， 13例出现了Ⅲ度骨髓抑制， 以白细胞、血小板下降为主， 予以细胞白介素(IL)-11、粒细胞集落刺激因子等治疗恢复正常；26例治疗后谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)一过性轻中度升高， 血清白蛋白下降， 予以保肝、补充人血白蛋白后1～2周恢复正常；17例出现低热、轻中度恶心、呕吐， 经抗炎、补液、保护胃黏膜及止吐等对症处理好转。
3 讨论
, 百拇医药
Th17细胞是近年来新发现的一种CD4+T细胞亚群， 来源于前体T淋巴细胞， 因分泌IL-17而被命名。IL-17则通过刺激肿瘤基质细胞及成纤维细胞， 使肿瘤微环境发生炎性反应， 促进一些血管源性因子(CXCL1、CXCL5、CXCL6等)高表达， 促肿瘤组织微血管形成[3]；IL-17还通过诱导IL-6生成， 激活致癌Stat3信号通路， 进一步促血管形成并促存活基因上调。另一方面， IL-17的高表达致肿瘤微环境中干扰素-γ(IFN-γ)生成减少， 而IFN-γ的下降必然会抑制Fas介导的细胞毒T淋巴细胞的毒效应机制， 使机体免疫监视功能下降， 肿瘤细胞发生免疫逃逸[4]。文献报道[5]肝癌组织中Th17细胞浸润数目升高， Ⅲ、Ⅳ期明显高于Ⅰ、Ⅱ期， IL-17蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常肝组织， 并随着肿瘤的浸润、转移呈升高趋势， 说明Th17细胞是肝癌的促效应细胞， 其数量的多少可作为判断肝细胞癌侵袭性、进展以及预后的一个潜在的重要指标。
CD4+T细胞介导的细胞免疫在机体抗肿瘤效应中起关键作用， 临床研究证实[6]， 原发性肝癌患者细胞免疫功能低下， 表现为外周血CD4+T细胞数量下降， CD4+/CD8+比值倒置， 外周血CD4+T淋巴细胞数量与AFP、肿块大小、临床分期和肿瘤恶性程度密切相关。本研究显示43例肝癌患者治疗前与健康体检者相比外周血CD3+T、CD4+T细胞数量及CD4+/CD8+比值下降， CD8+T细胞及Th17细胞数量增多， 存在T淋巴细胞亚群紊乱， 与临床报道一致[7]。, 百拇医药(侯继院 张松 刘兴安 单国用)