胃肠间质瘤基因突变与免疫组化表达的关系研究
【摘要】 目的 研究胃肠间质瘤(GISTs)基因突变与免疫组化表达的关系。方法 分别对102例GISTs患者(GISTs组)及50例非GISTs间叶源性肿瘤患者(非GISTs组)的DOG1及CD117表达进行比较， 检测GISTs组IGFIR表达情况， 同时检测90例GISTs患者c-KIT及PDGFRA基因突变情况。结果 102例GISTs患者中DOG1阳性表达率为91.18%(93/102)、CD117为93.14%(95/102)、IGFIR为6.86%(7/102)， 50例非GISTs间叶源性肿瘤中DOG1阳性表达率为10.00%(5/50)， CD117为18.00%(9/50)， 两组DOG1及CD117阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 检测DOG1及CD117可实现对胃肠间质瘤基因突变的有效诊断， 而IGFIR考虑为野生型GISTs特异性的免疫组化指标以及潜在治疗靶点， 应结合免疫组化表达情况对GISTs基因突变进行分析。
【关键词】 胃肠间质瘤；基因突变；免疫组化
, http://www.100md.com
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.31.015
GISTs为临床常见胃肠道间叶组织来源肿瘤， 在胃、小肠等消化道部位均可发生， 晚期还可发生转移， 主要分为上皮细胞型、梭形细胞型以及混合型， 目前其诊断主要通过组织形态学结合免疫组化检测结果[1]。本次研究旨在初步分析GISTs基因突变与免疫组化表达的关系， 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院2011年8月～2014年11月102例GISTs患者(GISTs组)为研究对象， 其中男61例， 女41例， 年龄22～81岁， 平均年龄(48.26±4.85)岁， 肿瘤大小3.0 mm～ 28.5 cm， 平均大小(5.26±1.74)cm；病灶处于胃中51例， 小肠23例， 直肠13例， 结肠5例， 其他10例；梭形72例， 混合型25例， 上皮型5例；GISTs危险度可分为极低危险度6例、低危险度38例、中危险度25例、高危险度33例。另选50例非GISTs间叶源性肿瘤患者(非GISTs组)。两组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)， 具有可比性。
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1. 2 方法
1. 2. 1 CD117、IGFIR及DOG1免疫组化检测 50例非GISTs间叶源性肿瘤患者仅检测DOG1及CD117。免疫组化CD117、IGFIR及DOG1试剂均购自英国Abcam公司， 常规脱蜡、水化处理， 一、二抗孵育， DAB显色后苏木素复染， 脱水透明后封片， 借助光学显微镜对结果进行观察。将PBS作为阴性对照， DOG1、CD117主要定位于细胞质， 在细胞膜中表达较少， IGFIR则以胞膜表达为主， 于显微镜下观察的切片染色情况， 根据颜色计分， 1分：淡黄；2分：浅褐；3分：深褐；同时结合阳性范围， 即1分：0～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：76%～100%。上述分数相加如为0分则为阴性， 2～3分为+， 4～5分为++， 6～7分为+++。
1. 2. 2 基因突变检测 通过美国西格诺公司提供的MassARRAY DNA质谱阵列基因分析系统对90例GISTs患者基因突变情况(C-KIT、PDGFRA)进行检测。
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1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 两组DOG1、CD117阳性表达率比较 GISTs组DOG1、CD117阳性表达率显著高于非GISTs组， 对比差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。
2. 2 c-KIT、PDGFRA基因突变分析 90例GISTs患者c-KIT基因突变率65.56%(59/90)， PDGFRA基因突变率为24.44% (22/90)， 另外有12例非c-KIT、PDGFRA基因突变， 即野生GISTs， 9例IGFIR免疫组化呈阳性。
3 讨论
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GISTs是最常见的胃肠道间叶源性肿瘤， 多见于胃及小肠发病， 发病年龄多为55～65岁[2]。CD117为c-KIT基因蛋白表达产物， 是受体酪氨酸酶家族成员， 在83%～95%的GISTs中表达， 是GISTs特异性诊断指标， 但仍有5%左右患者呈阴性表达， 因此其诊断难度较大[3]。而DOG1在与CD117保持类似敏感度的前提下特异性甚至更高， 本次研究中DOG1阳性率为91.18%， 低于CD117的93.14%， 两者诊断阳性率均显著高于非GISTs组(P<0.05)， 表示联合CD117、DOG1诊断可提高阳性率。同时本研究9例IGFIR阳性均为野生型GISTs， 表示IGFIR可作为野生型GISTs特异性筛查指标。
本次研究c-KIT、PDGFRA基因突变率分别为65.56%、24.44%， 与相关研究比较偏低， 考虑可能受检测方式及样本量的影响。有研究显示不同肿瘤发生部位对c-KIT、PDGFRA基因突变率有较大影响， 以胃部突变率最高[4， 5]， 对此考虑可将肿瘤原发部位与基因突变的检测结果联合， 从而实现对GISTs患者治疗效果的综合评判。
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综上所述， DOG1、CD117联合检测可提高GISTs准确性， 而IGFIR可作为野生型GISTs特异性筛查指标， 应结合免疫组化表达情况对GISTs基因突变进行分析。
参考文献
[1]秦岭， 李荣， 张军一， 等.胃肠间质瘤相关基因表达及突变的研究.临床肿瘤学杂志， 2012， 17(10)：874-879.
[2]刘泳冬， 赵薇薇， 陈慧娟， 等.重视标本固定以提高胃肠间质瘤的诊断质量.中华胃肠外科杂志， 2012， 15(3)：234-235.
[3] 王原原， 温冰.胃肠间质瘤的治疗进展.临床消化病杂志， 2012， 24(1)：53-55.
[4] 祁义军， 孟翔凌， 赵文娣， 等.胃肠间质瘤161例临床病理特征和预后相关因素分析.安徽医科大学学报， 2012， 47(8)：963-965.
[5] 潘献柱， 吴强.胃肠间质瘤组织中MMP-14与CD147的表达及其意义.诊断病理学杂志， 2013， 20(7)：401-403.
[收稿日期：2015-04-29], http://www.100md.com(卜晓红)
【关键词】 胃肠间质瘤；基因突变；免疫组化
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DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.31.015
GISTs为临床常见胃肠道间叶组织来源肿瘤， 在胃、小肠等消化道部位均可发生， 晚期还可发生转移， 主要分为上皮细胞型、梭形细胞型以及混合型， 目前其诊断主要通过组织形态学结合免疫组化检测结果[1]。本次研究旨在初步分析GISTs基因突变与免疫组化表达的关系， 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院2011年8月～2014年11月102例GISTs患者(GISTs组)为研究对象， 其中男61例， 女41例， 年龄22～81岁， 平均年龄(48.26±4.85)岁， 肿瘤大小3.0 mm～ 28.5 cm， 平均大小(5.26±1.74)cm；病灶处于胃中51例， 小肠23例， 直肠13例， 结肠5例， 其他10例；梭形72例， 混合型25例， 上皮型5例；GISTs危险度可分为极低危险度6例、低危险度38例、中危险度25例、高危险度33例。另选50例非GISTs间叶源性肿瘤患者(非GISTs组)。两组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)， 具有可比性。
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1. 2 方法
1. 2. 1 CD117、IGFIR及DOG1免疫组化检测 50例非GISTs间叶源性肿瘤患者仅检测DOG1及CD117。免疫组化CD117、IGFIR及DOG1试剂均购自英国Abcam公司， 常规脱蜡、水化处理， 一、二抗孵育， DAB显色后苏木素复染， 脱水透明后封片， 借助光学显微镜对结果进行观察。将PBS作为阴性对照， DOG1、CD117主要定位于细胞质， 在细胞膜中表达较少， IGFIR则以胞膜表达为主， 于显微镜下观察的切片染色情况， 根据颜色计分， 1分：淡黄；2分：浅褐；3分：深褐；同时结合阳性范围， 即1分：0～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：76%～100%。上述分数相加如为0分则为阴性， 2～3分为+， 4～5分为++， 6～7分为+++。
1. 2. 2 基因突变检测 通过美国西格诺公司提供的MassARRAY DNA质谱阵列基因分析系统对90例GISTs患者基因突变情况(C-KIT、PDGFRA)进行检测。
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1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差( x-±s)表示， 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 两组DOG1、CD117阳性表达率比较 GISTs组DOG1、CD117阳性表达率显著高于非GISTs组， 对比差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。
2. 2 c-KIT、PDGFRA基因突变分析 90例GISTs患者c-KIT基因突变率65.56%(59/90)， PDGFRA基因突变率为24.44% (22/90)， 另外有12例非c-KIT、PDGFRA基因突变， 即野生GISTs， 9例IGFIR免疫组化呈阳性。
3 讨论
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GISTs是最常见的胃肠道间叶源性肿瘤， 多见于胃及小肠发病， 发病年龄多为55～65岁[2]。CD117为c-KIT基因蛋白表达产物， 是受体酪氨酸酶家族成员， 在83%～95%的GISTs中表达， 是GISTs特异性诊断指标， 但仍有5%左右患者呈阴性表达， 因此其诊断难度较大[3]。而DOG1在与CD117保持类似敏感度的前提下特异性甚至更高， 本次研究中DOG1阳性率为91.18%， 低于CD117的93.14%， 两者诊断阳性率均显著高于非GISTs组(P<0.05)， 表示联合CD117、DOG1诊断可提高阳性率。同时本研究9例IGFIR阳性均为野生型GISTs， 表示IGFIR可作为野生型GISTs特异性筛查指标。
本次研究c-KIT、PDGFRA基因突变率分别为65.56%、24.44%， 与相关研究比较偏低， 考虑可能受检测方式及样本量的影响。有研究显示不同肿瘤发生部位对c-KIT、PDGFRA基因突变率有较大影响， 以胃部突变率最高[4， 5]， 对此考虑可将肿瘤原发部位与基因突变的检测结果联合， 从而实现对GISTs患者治疗效果的综合评判。
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综上所述， DOG1、CD117联合检测可提高GISTs准确性， 而IGFIR可作为野生型GISTs特异性筛查指标， 应结合免疫组化表达情况对GISTs基因突变进行分析。
参考文献
[1]秦岭， 李荣， 张军一， 等.胃肠间质瘤相关基因表达及突变的研究.临床肿瘤学杂志， 2012， 17(10)：874-879.
[2]刘泳冬， 赵薇薇， 陈慧娟， 等.重视标本固定以提高胃肠间质瘤的诊断质量.中华胃肠外科杂志， 2012， 15(3)：234-235.
[3] 王原原， 温冰.胃肠间质瘤的治疗进展.临床消化病杂志， 2012， 24(1)：53-55.
[4] 祁义军， 孟翔凌， 赵文娣， 等.胃肠间质瘤161例临床病理特征和预后相关因素分析.安徽医科大学学报， 2012， 47(8)：963-965.
[5] 潘献柱， 吴强.胃肠间质瘤组织中MMP-14与CD147的表达及其意义.诊断病理学杂志， 2013， 20(7)：401-403.
[收稿日期：2015-04-29], http://www.100md.com(卜晓红)