载体介导shRNA对胃癌细胞株MKN45中C—met的抑制作用(2)
据Roder[1]报道, 我国为胃癌的高发地区。有研究发现[2], RNA干扰是人为引入与内源靶基因具有相同序列双链RNA, 诱导内源靶基因的mRNA降解, 达到阻止基因表达的目的。现将研究结果报告如下。1 材料与方法
1. 1 材料 胃癌细胞株MKN45购自上海市消化疾病研究所(共9株);实时荧光定量聚合酶链反应试剂盒购自美国Promega公司;小鼠抗人β-肌动蛋白(β-actin)一抗、小鼠抗人C-met一抗、辣根过氧化物物酶标记兔抗小鼠二抗购自美国Santa Cruz公司; C-met shRNA和阴性对照购自美国OPEN-BIOSYSTEMS公司。
1. 2 方法 实验分组:转染组(转染shRNA)、阴性对照组(转染错义序列)和空白对照组(未转染shRNA), 各3株。细胞转染, RT-PCR检测各组的C-met的 mRNA表达, 读取每孔的CT值[3, 4], 计算各分组目的基因相对定量值 ......
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